[发明专利]基于多酶恒温快速扩增技术检测结核分枝杆菌复合群及rpoB突变的引物探针组及其应用有效
| 申请号： | 202010189509.0 | 申请日： | 2020-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN111057783B | 公开（公告）日： | 2020-06-30 |
| 发明（设计）人： | 赵丽丽;万康林;李马超;刘海灿 | 申请（专利权）人： | 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/32 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 商秀玲 |
| 地址： | 102206 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 恒温 快速 扩增 技术 检测 结核 分枝杆菌 复合 rpob 突变 引物 探针 及其 应用 | ||
1.引物探针组在制备通过检测rpoB基因突变区分鉴别结核分枝杆菌复合群菌株与非结核分枝杆菌的试剂中的应用；
所述rpoB基因突变位于如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的第1296位，结核分枝杆菌复合群菌株的该位点为A，非结核分枝杆菌的该位点为G；
所述引物探针组包括上游引物和探针，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述区分鉴别结核分枝杆菌复合群菌株与非结核分枝杆菌采用多酶恒温扩增反应，所述多酶恒温扩增反应的反应体系中，所述上游引物与所述探针的摩尔比为（1.5~3）：1。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述多酶恒温扩增反应的反应体系包括：重组酶200~290ng/µl、恒温聚合酶80~160ng/µl、单链结合蛋白190~270ng/µl、辅助蛋白60~110ng/µl、核酸外切酶70~130ng/µl、dNTPs 0.2~1mM、聚乙二醇2~4%、Tris-HCl 20~40mM、醋酸镁280~300mM、上游引物0.4~0.6μM、探针0.18~0.3μM、ddH2O和待测样品；所述多酶恒温扩增反应的反应程序为：37~42℃反应20~25min。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，利用侧向流动试纸条检测多酶恒温扩增反应的产物，根据试纸条的质控线和检测线颜色变化结果判断待测菌株是否为结核分枝杆菌复合群菌株。
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