[发明专利]一种用于基因测序的细胞组织核酸提取方法

说明书

本发明公开了一种用于基因测序的细胞组织核酸提取方法，具体步骤如下：S1、取动物组织于离心管中，加入STE缓冲液，使用涡旋振荡器，混合，得溶液一；S2、向溶液一中加入十二烷基磺酸钠溶液和蛋白酶K，放入翻转离心装置，混匀，得溶液二；S3、将离心管冷却至室温，先向溶液二中加入Tris‑饱和酚、氯仿和异戊醇的混合溶液，经翻转摇匀、离心，得溶液三；S4、将溶液三中的上清液转移至另一离心管中，加入冰无水乙醇，析出团状物后用移液枪吸入干净的离心管中，用75％乙醇洗涤两次，晾干后即得纯化后的核酸；通过使用本发明提供的翻转离心装置，可以方便对离心管进行竖直方向的旋转，也可以对离心管进行水平方向的旋转，达到对样品摇匀、离心的效果。

技术领域

本发明涉及核酸纯化技术领域，具体涉及一种用于基因测序的细胞组织核酸提取方法。

背景技术

基因测序使用的DNA和RNA样品常常依赖于获得纯化的核酸样品。DNA或RNA的来源众多，如组织、细胞、全血、血浆、血清、提取物，其可以获自生物体(例如，人、动物、植物、细菌、病毒等)，核酸的纯化通常需要分离DNA或RNA与样品源中的其他组分，以使多核酸不含其他细胞酶、蛋白质、化合物和/或碎片。

最早的纯化DNA或RNA的技术之一是使用例如蛋白酶K裂解细胞或组织样品，向裂解物中添加等体积的苯酚氯仿溶液来提取非核酸物质(例如，蛋白质、细胞器等)，并移出含有核酸的水相以供进一步使用。通常通过用乙醇或异丙醇沉淀从水相回收核酸。该技术的改良包括进一步向有机相添加少量的异戊醇以助于RNases失活。虽然苯酚氯仿提取可以获得高纯度和高回收率核酸，但是该方法仍有缺点，如操作过程中需要对核酸样品进行反复离心和翻转混合，目前没有一种可供两种用途的装置来实现此操作。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于基因测序的细胞组织核酸提取方法，通过酚氯仿提取核酸的方法，可以对核酸进行有效纯化；通过使用本发明提供的翻转离心装置，可以方便对离心管进行竖直方向的旋转，使离心管中的样品充分混合均匀，也可以对离心管进行水平方向的旋转，达到离心的效果。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种用于基因测序的细胞组织核酸提取方法，具体步骤如下：

S1、取动物组织于离心管中，加入STE缓冲液，使用涡旋振荡器，混合0.5-2h，使组织细胞与STE缓冲液充分混合，得溶液一，每克动物组织加入8-12mLSTE缓冲液；

S2、向溶液一中加入10％的十二烷基磺酸钠溶液和10mg/μL的蛋白酶K，用封口膜封口，放入翻转离心装置的离心管槽中，盖上固定盖，并用锁紧杆锁紧固定盖，启动电热丝和风扇，升温至35-50℃，启动第二电机，翻转离心管5-10h，得溶液二；

S3、将离心管冷却至室温，先向溶液二中加入Tris-饱和酚，置于翻转离心装置中，启动第二电机，翻转摇匀0.5-1h，再加入氯仿和异戊醇的混合溶液，继续翻转摇匀0.5-1h，然后关闭第二电机，启动第一电机离心15～30min，得溶液三；

S4、将溶液三中的上清液转移至另一离心管中，加入-20～-10℃的无水乙醇，静置15～30min，析出团状物后用移液枪吸入干净的离心管中，用75％乙醇洗涤两次，即得纯化后的核酸。

酚是强蛋白质变性剂，能有效使动物组织内的蛋白质变性而除去，氯仿有强烈的脂溶性，能够去除动物组织内的脂类杂质，酚与水有较大的互溶性，如果单独使用酚对蛋白质进行抽提，抽提后会有大量的酚溶解到水相中，在后续操作中酚会抑制很多酶反应，而将酚与氯仿混合使用，则会大大减少酚的残留量；加入异戊醇，可以降低界面之间的表面张力，从而可以减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡，另外，异戊醇有助于离心后混合溶液的分相；十二烷基磺酸钠溶液能够溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，从而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，而且十二烷基磺酸钠还能与蛋白质结合而沉淀，从而达到分离蛋白质的作用；蛋白酶K能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，从而达到去除蛋白质的作用。