[发明专利]一种快速检测血清中酪氨酸酶的试纸条及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种快速检测血清中酪氨酸酶的试纸条及其制备方法与应用。该试纸条检测酪氨酸酶的方法，首先制备检测试纸条；然后配制一系列不同浓度的酪氨酸酶标准溶液与相同浓度的多巴胺混合一定时间后，将混合溶液滴在检测试纸条上反应，试纸条显现不同的颜色，作为标准比色卡使用；本发明通过设计标准比色卡，可实时、快速的根据体系的颜色来检测待测酪氨酸酶的活性，并且设计了紫外吸光度与酪氨酸酶活性的标准曲线，通过测试体系的紫外可见光吸收光谱，将相关数据代入标准曲线即可得到准确的酪氨酸酶活性，不需要使用贵重的仪器，检测方法更简便、经济，具有较高的实用价值。

技术领域

本发明涉及一种快速检测血清中酪氨酸酶的试纸条及其制备方法与应用，属于分析检测的技术领域。

背景技术

酪氨酸酶（TYR），又称为多酚氧化酶，是一种含铜的金属酶，广泛分布于微生物、动植物及人体中。酪氨酸酶在生物体中具有重要的生理功能，是黑色素生物合成途径中的关键酶，与人体雀斑、褐斑等黑色素过度沉积等疾病的发生有关，与昆虫的蜕皮和果蔬的褐化也有很大关系。因此对酪氨酸酶的活性水平的检测，不仅能为临床疾病如恶性黑色素瘤等诊断和治疗提供依据，同时在食品工业中果蔬保鲜及环境监测等多个领域有重要的意义。

目前国内外已经有报道的关于酪氨酸酶的活性测定的方法主要包括放射性同位素检测法、高效液相色谱法、荧光检测法等。但这些方法都存在一些局限性，操作复杂、分析时间长、分析成本高等，从而限制了它们的广泛使用。化学和生物传感器方法具有简单，快速，有效检测的优点，已经被开发出来，然而化学和生物传感器检测汞离子方法无法实现现场检测的效果。中国专利号CN 108152495 A公开了一种检测酪氨酸的胶体金试纸，但是需要利用到酶联反应，抗原抗体价格昂贵。因此研发一种快速的、免仪器现场即时检测的、高灵敏度和高选择性的检测酪氨酸酶的方法对食品安全和临床诊断领域具有重大意义。

发明内容

为了解决上述问题，本本发明的目的在于提供一种基于功能化纳米金核壳结构材料的试纸条检测血清中酪氨酸酶的方法，以实时、快速、经济、实用地检测血清中酪氨酸酶含量。

本发明的技术方案如下：

一种快速检测血清中酪氨酸酶的检测试纸条的制备方法，步骤如下：

S1、Au^PB@Au 胶体的合成

取10mL纳米金胶溶液，加入10μL浓度为0.1mol/L的普鲁士蓝溶液作为拉曼信号分子，搅拌混合均匀后离心，重新悬浮于10mL超纯水中，得Au@PB胶体；往10mL的制备好的Au@PB胶体中加入250μL浓度为6*10^-2 mol/L的柠檬酸钠溶液，磁力搅拌加热至沸腾后，加入2.5mL浓度为1mmol/L氯金酸溶液后停止加热，继续磁力搅拌1h后，将胶体离心洗涤2次，重新分散于5mL超纯水中，得到Au^PB@Au胶体；

S2、功能化Au^PB@Au NPs的制备

将步骤S1制备好的Au^PB@Au胶体与Fe（NTA）溶液按体积1:1混合后，搅拌混合后，离心洗涤除去未反应的Fe（NTA），去除上清液，重分散备用，即得功能化Au^PB@Au NPs；

S3、将试纸条基材充分浸泡在3-巯丙基甲基二甲氧基硅烷乙醇溶液中30min，取出后用蒸馏水和无水乙醇分别进行漂洗，通过有机硅烷耦合作用在纸张纤维表面自组装形成一层单分子层，烘干备用得功能化的试纸条；将其功能化的试纸条基材放入100mLG4的玻璃砂芯漏斗装置中，取制备好50mL的功能化Au^PB@Au NPs材料倒入砂芯漏斗装置中，抽滤，最后将滤纸取出干燥即为检测试纸条。

进一步地，所述Fe（NTA）溶液的合成方法如下：