[发明专利]一种快速检测血清中酪氨酸酶的试纸条及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种快速检测血清中酪氨酸酶的检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、Au^PB@Au 胶体的合成

取10mL纳米金胶溶液，加入10-20μL浓度为0.1mol/L的普鲁士蓝溶液作为拉曼信号分子，搅拌混合均匀后离心，重新悬浮于10mL超纯水中，得Au@PB胶体；往10mL的制备好的Au@PB胶体中加入250μL浓度为6*10^-2 mol/L的柠檬酸钠溶液，磁力搅拌加热至沸腾后，加入2.5mL浓度为1mmol/L氯金酸溶液后停止加热，继续磁力搅拌1h后，将胶体离心洗涤2次，重新分散于5mL超纯水中，得到Au^PB@Au胶体；

S2、功能化Au^PB@Au NPs的制备

将步骤S1制备好的Au^PB@Au胶体与Fe（NTA）溶液按体积1:1混合后，搅拌混合后，离心洗涤除去未反应的Fe（NTA），去除上清液，重分散备用，即得功能化Au^PB@Au NPs；

S3、将试纸条基材充分浸泡在3-巯丙基甲基二甲氧基硅烷乙醇溶液中，取出后用蒸馏水和无水乙醇分别进行漂洗，通过有机硅烷耦合作用在纸张纤维表面自组装形成一层单分子层，烘干备用即为功能化的试纸条；将其功能化的试纸条基材放入100mLG4的玻璃砂芯漏斗装置中，取50mL-100mL的制备好的功能化Au^PB@Au NPs材料倒入均匀的砂芯漏斗装置中，抽滤，最后将滤纸取出干燥即为检测试纸条。

2.根据权利要求1所述的快速检测血清中酪氨酸酶的检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述Fe（NTA）溶液的合成方法如下：首先取浓度为10⁻³ M的九水硝酸铁溶液和浓度为10⁻³ M的氨三乙酸三钠溶液按体积1:1混合后，往溶液中添加pH调节剂调节Fe（NTA）溶液的pH 为7.0，混合液静置，得Fe（NTA）溶液。

3.根据权利要求1所述的快速检测血清中酪氨酸酶的检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述纳米金胶溶液的制备方法如下：取100mL质量分数为0.01%的氯金酸溶液在磁力搅拌下加热至沸腾；然后取1-1.5 mL质量分数为1%柠檬酸钠溶液，加入到沸腾的上述氯金酸溶液中，待沸腾15min后，反应结束，冷却至室温，制成纳米金溶胶。

4.根据权利要求1所述的一种快速检测血清中酪氨酸酶的检测试纸条的制备方法，其特征在于：步骤S3中的试纸条基材为滤纸、玻璃纸、无纺布、纤维素膜或淀粉膜。

5.根据权利要求1所述的快速检测血清中酪氨酸酶的检测试纸条的制备方法，其特征在于：步骤S3中滤纸与3-巯丙基甲基二甲氧基硅烷乙醇溶液的浸泡时间为20-60min。

6.一种如权利要求1-5任一项所述方法制备的检测血清中酪氨酸酶的检测试纸条。

7.一种利用权利要求6所述检测试纸条检测酪氨酸酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）制作标准比色卡：将不同浓度的酪氨酸酶标准溶液（500U/mL、400U/mL、300U/mL、200U/mL、100U/mL、50U/mL、10U/mL、0U/mL）与多巴胺混合，依次滴加10μL在检测试纸条上，室温反应0.5-1.5分钟后晾干，记录检测试纸条颜色，根据不同颜色，整理得到酪氨酸酶标准比色卡；

2）检测酪氨酸酶：将待测样品与多巴胺混合后滴到检测试纸条上，室温反应0.5-1.5分钟后晾干，然后观察检测试纸条的颜色，并与步骤1）所得标准比色卡进行对照，通过颜色对比，估算出待测血清中的酪氨酸酶含量。

8.根据权利要求7所述的一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：酪氨酸酶标准溶液的浓度为500U/mL、400U/mL、300U/mL、200U/mL、100U/mL、50U/mL、10U/mL和0U/mL；分别对应的比色卡的颜色分别为深红、酒红、紫红、淡紫红、淡紫、蓝紫、紫灰和灰色。

9.根据权利要求7所述的一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：步骤1）中的多巴胺浓度为10^-3M。