[发明专利]通过使用绿蝇短膜虫细胞和荧光显微术来检测患者样品的抗体与双链DNA的结合的方法

说明书

本发明涉及用于借助于荧光显微术和借助于数字图像处理通过使用绿蝇短膜虫(Crithidia luciliae)细胞来检测患者样品的自身抗体与双链脱氧核糖核酸(DNA)的结合的方法和装置。

本发明涉及用于借助于荧光显微术和借助于数字图像处理通过使用绿蝇短膜虫(Crithidia luciliae)细胞来检测患者样品的自身抗体与双链脱氧核糖核酸(DNA)的结合的方法和装置。

针对脱氧核糖核酸(DNA)的自身抗体的检测例如对于SLE(系统性红斑狼疮或播散性红斑狼疮)的诊断具有决定性意义。原则上，在这种情况下必须区分两种类型：针对dsDNA的抗体和针对单链变性DNA(单链DNA，ssDNA)的抗体。针对dsDNA的抗体与位于DNA的脱氧核糖磷酸骨架中的表位反应。与此相反，针对ssDNA的抗体主要与来自嘌呤和嘧啶碱基的区域的表位结合。但是它们也能够识别脱氧核糖磷酸骨架的表位。抗-dsDNA抗体几乎仅在SLE中发现。其患病率，视检测方法和疾病活动性而定，为20％至90％。抗-dsDNA抗体偶尔也在具有其他自身免疫疾病和感染的患者中以及在罕见情况下在临床上健康的人中检测到。后者在85％的情况下在抗-dsDNA首次检测后5年内发展为SLE。然而，如果不存在针对dsDNA的抗体，并不能完全排除SLE。SLE是来自胶原病这一组的系统性自身免疫疾病。诊断由美国风湿病学会(ACR)的1997年修改的11条标准指导。在存在11条标准中的4条的情况下，可以以80％至90％的确定性诊断SLE。

间接免疫荧光是用于测定针对dsDNA的人抗体的体外测试。例如，涂覆有绿蝇短膜虫涂片的所谓BIOCHIP可以用作基材。将这些例如与经稀释的患者样品一起进行温育。在阳性反应的情况下，特异性抗体与抗原结合。将经结合的抗体(IgG)在第二个温育步骤中例如用经荧光素标记的抗人抗体进行染色并且在荧光显微镜下使其可见。

因此，从现有技术知道，提供基材，其中在所述基材上固定多个绿蝇短膜虫细胞。这样的固定可以例如借助于乙醇来实现。

然后，将所述基材与患者样品(优选地，经稀释的血清)一起进行温育，其中所述患者样品潜在地具有待检测的自身抗体。根据现有技术，然后可以将所述细胞或所述基材与所谓的缀合物一起进行温育，所述缀合物具有用例如绿色荧光染料进行标记的二抗。

然后，在用激发光照射经温育的基材后，可以采集由绿色荧光染料发出的荧光辐射作为荧光显微术的显微图像。

示例性地，图1中以图像SB呈现了这样的显微图像。

图2中再一次更详细地呈现了来自图1的单个短膜虫细胞CR。一个绿蝇短膜虫细胞CR的这样的分图像TB清楚地显示了在动基体K上的染色，动基体也被称为线粒体。在细胞核Z上以及在基体B上也有染色。

为了可靠地检测来自患者样品的自身抗体与双链DNA的结合，决定性的是检测在基材的荧光图像SB中多个动基体的染色。如图2中所显示的，对于细胞核Z以及对于基体B也可以有结合或染色，因此必须借助于图像处理，相关于其在图像中的位置可靠地确定动基体K。

然后，通过关于在荧光图像SB中的各个绿蝇短膜虫细胞的各个动基体的各个染色进行评价，可以总计确定患者样品的自身抗体与双链DNA的以平均值显示的总结合。

因此，本发明的任务是，提供一种使用数字图像处理的方法以确定来自患者样品的自身抗体与双链DNA的结合，其中可以可靠地确定在荧光图像内的不同绿蝇短膜虫细胞的不同动基体区域的染色。