[发明专利]一种测定细胞增殖速率的方法

说明书

本发明公开了一种测定细胞增殖速率的方法，包括以下步骤：步骤1)、获取细胞并将获得的细胞置于培养皿中培养；步骤2)、在培养皿中依次加入消化液、DMEM低糖培养液，消化收获细胞；步骤3)、调整细胞浓度后接种到96孔板上，然后在一段时间内按照时间先后顺序多次采用MTT法检测细胞数量；步骤4)、在酶标仪上测量各个时间点96孔板上每孔的OD570nm光密度值；步骤5)、以培养时间作为横坐标，以OD570nm光密度值作为纵坐标，用Excel软件做图，再对图“添加趋势线”和“添加公式和拟合度R²”，得到的公式的斜率作为细胞增殖速率的估测值。本发明结合MTT法、Excel软件和SPSS软件，不经能够精准测量细胞增殖速率，且能够比较多种细胞样本增殖速率是否存在显著性差异。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体涉及一种测定细胞增殖速率的方法。

背景技术

细胞增长速率是细胞培养过程中的一种重要指标。如何准确测量细胞的增长速率和关键，如果测量误差较大会影响对整个细胞培养的判断。

传统测量细胞增长速率的方法为：在某一时间点上测量一组数据，再进行平行比较。传统方法虽然简单直接，但是误差很大，因为细胞增殖是一个动态过程，在增殖过程中可能有些波动，只在一个时间点上测定不能有效地反映细胞的增殖状态，更精确的测量应该在一个时间段动态考察细胞的增殖状态。

基于行业对细胞增长速率更精确的测量应该在一个时间段动态考察细胞的增殖状态的认可，相关公司也推出了诸如“细胞动态分析仪”这样的产品，但是“细胞动态分析仪”价格昂贵，所以还不普及。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测定细胞增殖速率的方法，通过本发明所述方法不仅能够获得比较精确的细胞增殖速率，同时不会额外增加成本。

本发明通过下述技术方案实现：

一种测定细胞增殖速率的方法，包括以下步骤：

步骤1)、获取细胞并将获得的细胞置于培养皿中培养；

步骤2)、在培养皿中依次加入消化液、DMEM低糖培养液，消化收获细胞，并对对细胞数量计数；

步骤3)、调整细胞浓度后接种到96孔板上，然后在一段时间内按照时间先后顺序多次采用MTT法检测细胞数量；

步骤4)、在酶标仪上测量各个时间点96孔板上每孔的OD570nm光密度值；

步骤5)、以培养时间作为横坐标，以OD570nm光密度值作为纵坐标，用Excel软件做散点图，再对散点图“添加趋势线”和“添加公式和拟合度R²”，使得到的公式的斜率作为细胞增殖速率的估测值。

本发明通过在细胞依次进行培养、消化收获细胞并计数后，将细胞调整浓度后后接种到96孔板上，然后在一段时间内按照时间先后顺序多次采用MTT法检测细胞数量，即实现在一个时间段动态考察细胞在不同时间点的增殖状态的，再采用Excel软件进行拟合，避免了传统方法在一个时间点上进行平行比较导致的细胞增殖速率测量误差大的问题，通过本发明所述方法不仅能够获得比较精确的细胞增殖速率，同时不会额外增加成本。

进一步地，还包括：

步骤6)、在SPSS软件中，比较通过步骤1)-步骤5)获得的不同细胞培养的斜率是否有显著差异。

本发明结合MTT法、Excel软件和SPSS软件，不仅能够精准测量细胞增殖速率，且能够比较多种细胞样本增殖速率是否存在显著性差异。

进一步地，步骤1)中培养皿培养的条件为：

采用60mm培养皿，培养条件为37℃、5％CO₂，培养基为DMEM低糖培养液。