[发明专利]一种测定细胞增殖速率的方法

权利要求书

1.一种测定细胞增殖速率的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1)、获取细胞并将获得的细胞置于培养皿中培养；

步骤2)、在培养皿中依次加入消化液、DMEM低糖培养液，消化收获细胞，并对对细胞数量计数；

步骤3)、调整细胞浓度后接种到96孔板上，然后在一段时间内按照时间先后顺序多次采用MTT法检测细胞数量；

步骤4)、在酶标仪上测量各个时间点96孔板上每孔的OD570nm光密度值；

步骤5)、以培养时间作为横坐标，以OD570nm光密度值作为纵坐标，用Excel软件做散点图，再对散点图“添加趋势线”和“添加公式和拟合度R²”，使得到的公式的斜率作为细胞增殖速率的估测值。

2.根据权利要求1所述的一种测定细胞增殖速率的方法，其特征在于，还包括：

步骤6)、在SPSS软件中，比较通过步骤1)-步骤5)获得的不同细胞培养的斜率是否有显著差异。

3.根据权利要求1所述的一种测定细胞增殖速率的方法，其特征在于，步骤1)中培养皿培养的条件为：

采用60mm培养皿，培养条件为37℃、5％CO₂，培养基为DMEM低糖培养液。

4.根据权利要求1或3所述的一种测定细胞增殖速率的方法，其特征在于，所述DMEM低糖培养基包括以下组分：

10％胎牛血清、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素。

5.根据权利要求1所述的一种测定细胞增殖速率的方法，其特征在于，所述消化液包括以下组分：

0.05％胰蛋白酶和0.02％EDTA。

6.根据权利要求1所述的一种测定细胞增殖速率的方法，其特征在于，步骤2)所述消化收获细胞的具体过程为：

吸弃培养皿中的培养液，用无菌PBS洗两次，然后加入消化液，孵育5分钟后，加入完全的DMEM低糖培养液。

7.根据权利要求1所述的一种测定细胞增殖速率的方法，其特征在于，步骤3)中调整细胞浓度为10000/ml，96孔板上，接种量为每孔2000个细胞，接种体积为每孔200μl，每个实验条件做3个重复孔。

8.根据权利要求1所述的一种测定细胞增殖速率的方法，其特征在于，步骤3)中所述MTT法的具体过程为：

在96孔板的每孔加入20μl浓度为5mg/ml的MTT试剂母液，然后把96孔板置回培养箱中培养4小时，再吸弃培养孔中的液体部分，加入150μl二甲基亚砜，反复吹打以使培养孔底部沉淀的蓝色颗粒溶解。