[发明专利]一种抗生素耐药基因的定量检测方法

权利要求书

1.一种抗生素耐药基因的非疾病诊断目的的定量检测方法，包括如下步骤：以待测水产品携带细菌总DNA为模板，分别采用引物对Ⅰ至引物对Ⅵ进行荧光定量PCR扩增，根据Ct值对待水测产品中的tetA、sul2、cmlA、qnrS、aac(6')-Ib、blaPSE抗生素耐药基因进行定量；

所述引物对Ⅰ由引物tetA-F和引物tetA-R组成，所述引物tetA-F的序列为SEQ IDNO.1，所述引物tetA-R的序列为SEQ ID NO.2；

所述引物对Ⅱ由引物sul2-F和引物sul2-R组成，所述引物sul2-F的序列为SEQ IDNO.3，所述引物sul2-R的序列为SEQ ID NO.4；

所述引物对Ⅲ由引物cmlA-F和引物cmlA-R组成，所述引物cmlA-F的序列为SEQ IDNO.5，所述引物cmlA-R的序列为SEQ ID NO.6；

所述引物对Ⅳ由引物qnrS-F和引物qnrS-R组成，所述引物qnrS-F的序列为SEQ IDNO.7，所述引物qnrS-R的序列为SEQ ID NO.8；

所述引物对Ⅴ由引物aac(6')-Ib-F和引物aac(6')-Ib-R组成，所述引物aac(6')-Ib-F的序列为SEQ ID NO.9，所述引物aac(6')-Ib-R的序列为SEQ ID NO.10；

所述引物对Ⅵ由引物blaPSE-F和引物blaPSE-R组成，所述引物blaPSE-F的序列为SEQID NO.11，所述引物blaPSE-R的序列为SEQ ID NO.12；

所述荧光定量PCR扩增的体系为：10μL TB Premix Ex Taq，引物各0.4μL，2μL DNA模板，1μL 5.2-10.7mmol/L硫酸胍基丁胺，补充ddH₂O至20μL。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述荧光定量PCR扩增的反应条件为：95°C预变性30s；95°C变性5s，60°C退火30s，72°C延伸30s，40个循环。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述tetA、sul2、cmlA、qnrS、aac(6')-Ib的最低检出限在24-202copies/μL，blaPSE的最低检出限为6.6×10⁴copies/μL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述sul2和blaPSE之间，blaPSE和aac(6')-Ib之间，cmlA与qnrS之间呈显著正相关。

5.权利要求1-4任一项中所述的一种抗生素耐药基因的非疾病诊断目的的定量检测方法在评价水产品中微生物菌群抗生素耐药基因污染状况中的用途。