[发明专利]一种富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法

说明书

本发明实施例公开了一种富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，所述制备方法包括制取葡萄籽活性分子及自体纤维组织悬浮液、进行消化反应、盐析、蒸发浓缩和冷冻干燥。通过采用本申请方法制备的富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片能够有效解决现有的胶原蛋白保质期短，营养流失严重，葡萄籽活性分子变性失活的问题，且本申请的制备方法简单，适于企业大规模生产，给人们提供了极大方便。

技术领域

本发明实施例涉及医学美容技术领域，具体涉及一种富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法。

背景技术

胶原蛋白是生物高分子，动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的25％-30％，某些生物体甚至高达80％以上。胶原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性，因此在食品、医药、组织工程、化妆品等领域获得广泛的应用。

葡萄籽含有丰富的氨基酸、维生素及矿物质等，具有保健、美容之功效，其中就包括花青素与共轭亚油酸。葡萄籽提取物（原花青素OPC）具有非常强的体内活性。实验证明，OPC的抗自由基氧化能力是维生素E的50倍，维生素C的20倍，能有效清除体内多余的自由基，保护人体细胞组织免受自由基的氧化损伤，防治过敏、癌症、衰老等100多种与自由基有关的疾病，还具有加强和保护人体活性组织、稳定细胞膜以及抗酶活性（组胺脱羧酶）等生物特性，极具保健之功效。

但是胶原蛋白及葡萄籽活性物质保质期短，营养流失严重，易变质。给人们使用带来不良影响。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，用以解决现有的胶原蛋白及葡萄籽活性物质保质期短，营养流失严重，易变质等问题。

为实现上述目的，本发明实施例的技术方案为：一种富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、将成熟的自体纤维组织加入到超纯水中浸泡，期间不停搅拌直至成糊状将糊状的自体纤维组织粉碎并放入10倍体积的超纯水中，获得自体纤维组织悬浮液，向自体纤维组织悬浮液中加冰醋酸制得混合物，混合物的浓度为0 .5mg/mL，备用；

步骤二、向步骤一制备的混合物中加入胃蛋白酶溶液对纤维组织进行消化反应，消化反应结束后静置分层，将上层悬浮液放入离心机中进行离心，收集上清液，备用；

步骤三、将步骤二收集的上清液与NaCl溶液混合，之后进行离心，收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液称为：溶液1；

步骤四、将葡萄籽进行研磨碾碎后倒入HCl的甲醇溶液将后常温避光保持搅拌16-24h，过滤提取溶液。此时此溶液含有花青素及共轭亚油酸等葡萄籽中富含的生物活性分子。此溶液称为溶液2；

步骤五、按比例混合溶液1和溶液2并加入适量的普朗尼克F127，蒸发浓缩以去除有机溶剂甲醇，之后冷冻干燥即制得所述富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片。

在一些实施方案之中，所述的步骤五包括将溶液1与溶液2的混合溶液放入温度为30-40℃的旋蒸仪中去除甲醇，随后进行超声处理制备为花青素和共轭亚油酸的悬浊液。

在一些实施方案之中，悬浊液蒸发浓缩后置于冷冻仓内，将冷冻仓内的温度以0.2-0 .5℃/min的速度降至 -45℃，当冷肼温度达到-45℃后，保持所述冷肼温度3-6h，之后进行至少四次升温干燥。

在一些较为具体的实施方案之中，所述的四次升温干燥包括首先控制干燥仓内真空度为50-200pa，同时以0 .5-1 .5℃/h的速度升温至-25℃；之后控制干燥仓内真空度为40-150pa，以3-6℃/h的速度升温至-10℃；然后控制干燥仓内真空度为30-120pa ，以3-6℃/h的速度升温至10℃；最后控制干燥仓内真空度为30-100pa，以4-8℃/h的速度升温至35℃。