[发明专利]一种富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法

权利要求书

1.一种富含葡萄籽生物分子可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、将成熟的自体纤维组织加入到超纯水中浸泡，期间不停搅拌直至成糊状将糊状的自体纤维组织粉碎并放入10倍体积的超纯水中，获得自体纤维组织悬浮液，向自体纤维组织悬浮液中加冰醋酸制得混合物，混合物的浓度为0 .5mg/mL，备用；步骤二、向步骤一制备的混合物中加入胃蛋白酶溶液对纤维组织进行消化反应，消化反应结束后静置分层，将上层悬浮液放入离心机中进行离心，收集上清液，备用；步骤三、将步骤二收集的上清液与NaCl溶液混合，之后进行离心，收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液称为：溶液1；步骤四、将葡萄籽进行研磨碾碎后倒入HCl的甲醇溶液将后常温避光保持搅拌16-24h，过滤提取溶液，此时此溶液含有花青素及共轭亚油酸等葡萄籽中富含的生物活性分子，此溶液称为溶液2；步骤五、按比例混合溶液1和溶液2并加入适量的普朗尼克F127，蒸发浓缩以去除有机溶剂甲醇，之后冷冻干燥即制得所述富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片。

2.根据权利要求1所述富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：所述的步骤五包括将溶液1与溶液2的混合溶液放入温度为30-40℃的旋蒸仪中去除甲醇，随后进行超声处理制备为花青素和共轭亚油酸的悬浊液。

3.根据权利要求1所述富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：悬浊液蒸发浓缩后置于冷冻仓内，将冷冻仓内的温度以0 .2-0 .5℃/min的速度降至 -45℃，当冷肼温度达到-45℃后，保持所述冷肼温度3-6h，之后进行至少四次升温干燥。

4.根据权利要求3所述富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：所述的四次升温干燥包括首先控制干燥仓内真空度为50-200pa，同时以0 .5-1.5℃/h的速度升温至-25℃；之后控制干燥仓内真空度为40-150pa，以3-6℃/h的速度升温至-10℃；然后控制干燥仓内真空度为30-120pa ，以3-6℃/h的速度升温至10℃；最后控制干燥仓内真空度为30-100pa，以4-8℃/h的速度升温至35℃。

5.根据权利要求3所述富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：还可进行第五次升温干燥，所述第五次升温干燥包括控制干燥仓内真空度为30-40pa，控制温升速度在5 .5-6 .5℃/h继续升温至45℃。

6.根据权利要求1所述富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：向自体纤维组织悬浮液中加冰醋酸制得的混合物的浓度为0 .5mg/mL。

7.根据权利要求1所述富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：步骤二中胃蛋白酶溶液的制备方法包括先称取适当重量的胃蛋白酶，之后将胃蛋白酶溶于0 .5M醋酸中制成5mg/mL-20mg/mL的胃蛋白酶溶液。

8.根据权利要求1所述富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：所述的步骤二，包括将上层悬浮液放入转速为4000—5500r/min的离心机中进行离心操作，收集上清液，重复上述离心过程3—5次，收集上清液，备用。

9.根据权利要求1所述富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：所述的步骤三，包括将步骤二收集的上清液和NaCl溶液按重量配比混合，在转速为3000-10000r/min的离心机中离心5-30min，弃去上清液，沉淀物溶于乙酸，之后反复离心3—5次，收集上清液即制得溶液1。

10.根据权利要求9所述富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：沉淀用10倍体积的浓度为0 .5mol/L的乙酸溶解；根据权利要求1所述富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：所述的步骤四，包括提取葡萄籽活性分子的HCl溶液为1%的HCl甲醇溶液；根据权利要求1所述富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：所述的步骤四，包含提取葡萄籽活性分子溶液，每100g葡萄籽应经过研磨碾碎后在50-150mL的HCl甲醇溶液中进行萃取；根据权利要求1所述富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：所述的步骤五，包括溶液1与溶液2的混合比例为1mL溶液1加入0.2-2mL的溶液2；根据权利要求1所述富含葡萄籽生物分子的可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：所述的步骤五，包括溶液1与溶液2的混合溶液加入普朗尼克F127的量为：每1mL混合溶液加入10-50mg的普朗尼克F27。