[发明专利]Mbp基因过表达型小胶质细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种Mbp基因过表达型小胶质细胞及其制备方法和应用，涉及基因工程技术领域。本发明公开的制备方法包括将Mbp基因插入过表达慢病毒载体中，得到重组慢病毒载体，然后将重组慢病毒载体与慢病毒包装质粒共同转染宿主细胞以制备Mbp基因过表达的重组慢病毒，重组慢病毒感染小胶质细胞以得到Mbp基因过表达型小胶质细胞。该制备方法可以制备出Mbp基因过表达型小胶质细胞，该小胶质细胞可以稳定和高效表达Mbp基因，Mbp基因能够在小胶质细胞内发挥正常生物学作用，为研究MBP在小胶质细胞内的具体功能以及调控机制等提供可靠的细胞材料。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体而言，涉及Mbp基因过表达型小胶质细胞及其制备方法和应用。

背景技术

神经炎症是指发生在中枢神经系统及周围神经系统中的炎症反应。大量的研究发现，多种中枢神经疾病的发生发展与神经炎症密切相关，如阿尔茨海默病(Alzheimerdisease，AD)、帕金森病(PA20001809rkinson disease，PD)和脑梗死等。神经炎症主要通过炎症介质、炎性细胞因子及氧化应激产物的产生和释放造成神经元变性坏死，从而引发脑损伤。神经炎症相关疾病的不良预后严重影响了患者的生存生活质量，巨额治疗费用给家庭和社会带来沉重的负担，有研究表明PD每年给我国带来的经济负担大概170亿元。而且其不良预后严重影响了患者和家庭的生存生活质量。所以深入研究神经炎症的发生机制，有望为中枢神经系统疾病的预防和治疗提供新的思路和理论依据。

激活的小胶质细胞在神经炎症相关性疾病的发生发展过程中发挥重要作用。小胶质细胞由血液中的单核细胞演化而来。一般情况下，中枢神经系统内的小胶质细胞处于静止状态，病理状态下，如中枢神经系统疾病、中风等会导致小胶质细胞的活化。活化的小胶质细胞通过分泌炎症介质、共激活星形胶质细胞，引起大量自由基、一氧化氮、蛋白酶、炎症细胞因子等释放，致使中枢神经系统发生炎性损害和神经细胞死亡。此外，活化的小胶质细胞及其产生的细胞炎症因子亦可破坏血脑屏障结构，易于外周血中T淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞等进入脑内，与星形胶质细胞等共同产生更多的炎症介质，进而引起炎症级联反应，加重脑组织的损伤。

MBPs是髓鞘蛋白的重要构成成分,主要分布在中枢和周围神经系统的髓鞘形成细胞(少突胶质细胞及施旺细胞)内。巨噬细胞中有MBPs表达，Ling EA等人的研究发现两种MCs内均有Mbp基因表达。同时Filipovic R.研究小组发现激活小胶质细胞内MBPs表达增高。但是MBPs在小胶质细胞内的具体功能及调控机制目前仍不清楚且未见报道。而研究MBPs在小胶质细胞内的具体功能及调控机制又缺乏相应的细胞材料。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种Mbp基因过表达型小胶质细胞及其制备方法和应用。本发明提供的制备方法可以制备出Mbp基因过表达型小胶质细胞，该小胶质细胞可以稳定表达Mbp基因，该基因可在小胶质细胞内发挥正常生物学功能，本发明为研究MBP在小胶质细胞内的具体功能以及调控机制等提供可靠的细胞材料。

本发明是这样实现的：

一方面，本发明提供制备Mbp基因过表达型小胶质细胞的方法，其包括如下步骤：

重组过表达慢病毒包装步骤：将Mbp基因插入过表达慢病毒载体中，得到重组慢病毒载体，然后将所述重组慢病毒载体与慢病毒包装质粒共同转染宿主细胞以制备Mbp基因过表达的重组慢病毒；

其中，所述过表达慢病毒载体为LentiORF pLEX-MCS；

细胞侵染步骤：将所述Mbp过表达的重组慢病毒感染小胶质细胞以得到Mbp基因过表达型小胶质细胞。