[发明专利]Mbp基因过表达型小胶质细胞及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202010173815.5 | 申请日： | 2020-03-13 |
| 公开（公告）号： | CN111321170A | 公开（公告）日： | 2020-06-23 |
| 发明（设计）人： | 杨丽娟;周美玲;王姝蕾;王芳;肖继坪;陈波;易子寒;华海蓉 | 申请（专利权）人： | 昆明医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 周文波 |
| 地址： | 650000 云南省昆明市*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | mbp 基因 表达 胶质 细胞 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种制备Mbp基因过表达型小胶质细胞的方法，其特征在于，其包括如下步骤：
重组过表达慢病毒包装步骤：将Mbp基因插入过表达慢病毒载体中，得到重组慢病毒载体，然后将所述重组慢病毒载体与慢病毒包装质粒共同转染宿主细胞以制备Mbp基因过表达的重组慢病毒；
其中，所述过表达慢病毒载体为LentiORF pLEX-MCS；
细胞侵染步骤：将所述Mbp过表达的重组慢病毒感染小胶质细胞以得到Mbp基因过表达型小胶质细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述包装质粒包括pVSV-G、pRev和pRRE。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞为293T细胞。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述小胶质细胞的种属来源为哺乳动物。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物选自小鼠、大鼠、猪、牛、马和羊中的任意一种；
优选地，所述哺乳动物为小鼠。
6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，Mbp基因所编码的MBP蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
优选地，Mbp基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
7.一种Mbp基因过表达型小胶质细胞，其特征在于，其由权利要求1-6中任一项所述的方法制得。
8.权利要求7所述的Mbp基因过表达型小胶质细胞在研究Mbp基因功能或其调控机制中，或者在筛选治疗神经炎症药物中的应用。
9.一种用于制备Mbp基因过表达型小胶质细胞的载体组合物，其特征在于，其包括包装质粒和插入有Mbp基因的重组慢病毒载体，所述包装质粒用于与所述重组慢病毒载体配合使用转染宿主细胞，以制备Mbp基因过表达的重组慢病毒；
所述重组慢病毒载体的骨架为LentiORF pLEX-MCS；
所述重组慢病毒用以转染小胶质细胞以得到Mbp基因过表达型小胶质细胞。
10.根据权利要求9所述的载体组合物，其特征在于，所述包装质粒包括pVSV-G、pRev和pRRE；
优选地，所述宿主细胞为293T细胞；
优选地，所述小胶质细胞的种属来源为哺乳动物；
优选地，所述哺乳动物选自小鼠、大鼠、猪、牛、马和羊中的任意一种；
优选地，所述哺乳动物为小鼠；
优选地，Mbp基因所编码的MBP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
优选地，Mbp基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
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