[发明专利]超高效液相色谱串联质谱技术检测尿液中8种儿茶酚胺及其代谢物的方法

说明书

本发明涉及一种超高效液相色谱串联质谱技术检测尿液中8种儿茶酚胺及其代谢物的方法，先利用超高效液相色谱将待测物与尿液基质分离，再利用质谱同位素内标定量法，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物的峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算上述8种儿茶酚胺及其代谢物的含量。本发明的检测方法，前处理过程简单，不需要固相萃取或衍生化反应，成本低，且灵敏度高、特异性强，前处理10min内完成，4.5min之内完成8种儿茶酚胺及其代谢物的分离和检测，基质效应与精密度基本满足要求。

技术领域

本发明属于尿液检测技术领域，具体涉及一种超高效液相色谱串联质谱技术检测尿液中8种儿茶酚胺及其代谢物的方法。

背景技术

肾上腺素(Epinephrine，E)、去甲肾上腺素(Norepinephrine，NE)和多巴胺(Dopamine，DA)是酪氨酸在酶的作用下转化而来，这3种儿茶酚胺都是中枢神经系统的重要神经递质，在血管张力、肠和支气管平滑肌张力、心率和收缩力以及葡萄糖代谢等自我调节功能中发挥重要作用。3-甲氧基酪胺(3-Methoxytyramine，3MT)、变肾上腺素(Metanephrine，MN)和去甲变肾上腺素(Normetanephrine，NMN)分别是多巴胺、肾上腺素和去甲肾上腺素的代谢物。这些代谢物进一步代谢为香草扁桃酸(Vanillymandelic acid，VMA)和高香草酸(Homovanillic acid，HVA)。

嗜铬细胞瘤是一种罕见的、但有潜在致命性的肾上腺髓质嗜铬细胞瘤，它可引起高血压、心悸、严重头痛和出汗(“发作”)。嗜铬细胞瘤患者也可能无症状，表现为持续性高血压或偶然发现的肾上腺肿块。嗜铬细胞瘤和其他来源于神经嵴细胞(如副神经节瘤和神经母细胞瘤)的肿瘤分泌儿茶酚胺(肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺)。嗜铬细胞瘤细胞也有能力将甲基化的儿茶酚胺转化为分泌到血液循环中的变肾上腺素。在神经母细胞瘤和相关肿瘤(神经节神经母细胞瘤和神经节神经瘤)患者中，也可以观察到1种或几种儿茶酚胺水平的升高，偶尔在其他神经外胚层肿瘤中也可以观察到。在高度怀疑嗜铬细胞瘤的患者中，最好通过测量血浆儿茶酚胺来进行筛选。24小时尿儿茶酚胺可作为低可疑病例的首次检测，也可作为血浆儿茶酚胺升高不到2倍的患者的验证性研究。这是非常可取的，因为嗜铬细胞瘤人群发病率较低(每年小于1:100,000人)，检测24h尿液儿茶酚胺能避免大量患者接受不必要的、昂贵的、有时是危险的成像过程。

目前关于尿儿茶酚胺及其代谢物的检测种类基本在3～5种，而且前处理使用固相萃取，不仅前处理复杂，而且成本高。人体儿茶酚胺及其代谢物的升高或者降低与嗜铬细胞瘤、成交感神经瘤、特发性高血压、神经母细胞瘤等疾病有很大相关性，对于这些疾病的诊断具体有重要参考价值，因此开发能一同检测8种尿儿茶酚胺及其代谢物的方法更具有经济和应用价值。

发明内容

本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种超高效液相色谱串联质谱技术检测尿液中8种儿茶酚胺及其代谢物的方法。

本发明的技术方案如下：

一种超高效液相色谱串联质谱技术检测尿液中8种儿茶酚胺及其代谢物的方法，

所述8种儿茶酚胺及其代谢物分别为：肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、变肾上腺素(MN)、去甲变肾上腺素(NMN)、3-甲氧酪胺(3-MT)、高香草酸(HVA)和香草扁桃酸(VMA)；

上述8种儿茶酚胺及其代谢物对应的内标物分别为：肾上腺素-d3(E-d3)、去甲肾上腺素-d6(NE-d6)、多巴胺-d4(DA-d4)、变肾上腺素-d3(MN-d3)、去甲变肾上腺素-d3(NMN-d3)、3-甲氧酪胺-d4(3-MT-d4)、高香草酸-d3(HVA-d3)和香草扁桃酸-d3(VMA-d3)；