[发明专利]一种大豆快生根瘤菌SMH12的突变体及其应用

权利要求书

1.一种大豆快生根瘤菌SMH12的突变体，其特征在于，所述的突变体通过以下步骤构建得到：

1)以大豆快生根瘤菌SMH12的基因组DNA为模板，利用引物nopP-up-F/R和nopP-down-F/R分别扩增nopP同源交换上臂和下臂；其中：

nopP-up-F：ggtaccATCATCTGGCAATCGGTT；

nopP-up-R：catatgACGAGCTATCAATTCGACC；

nopP-down-F：gggcccGACTTACGAAGATGACTTCATG；

nopP-down-R：accggtCATCTACTTATGAGCTCCAGC；

2)将产物双酶切后分两步与消化的pCM351载体连接，得到质粒pCM351::nopP-up-down；

3)将质粒pCM351::nopP-up-down导入大豆快生型根瘤菌SMH12中转化，获得突变体。

2.根据权利要求1所述的一种大豆快生根瘤菌SMH12的突变体，其特征在于，步骤(2)具体为将同源上臂扩增产物经KpnI和NdeI双酶切后连接到载体pCM351得到pCM351::nopP-up，将同源下臂扩增产物经Apa I和Age I双酶切后连接至pCM351::nopP-up得到质粒pCM351::nopP-up-down。

3.根据权利要求1所述的一种大豆快生根瘤菌SMH12的突变体，其特征在于，步骤(3)中重组质粒上的交换片段与根瘤菌基因组中的nopP上、下游片段发生同源重组，整合到染色体上，进而将该基因置换。

4.根据权利要求1所述的一种大豆快生根瘤菌SMH12的突变体，其特征在于，经引物对nopP-MAP-R/Gm-F或nopP-MAP-F/Gm-R筛选转化子，进行PCR验证突变体；其中：

nopP-Map-F：AGTCGGGACGCAATGGAT；

nopP-Map-R：ACTCCACTTCCAATCACTCCG；

Gm-F：ATGTTACGCAGCAGCAACG；

Gm-R：TTAGGTGGCGGTACTTGGG。

5.权利要求1所述的大豆快生根瘤菌SMH12的突变体在提高豆科作物固氮能力中的应用。