[发明专利]Zma006493基因的应用、表达Zma006493的转基因拟南芥植株及制备方法

说明书

本发明公开了Zma006493基因的应用、表达Zma006493的转基因拟南芥植株及其制备方法。从玉米自交系B73中克隆出NAC家族成员Zma006493可以应用于制备抗逆植物。利用农杆菌介导的蘸花法转化野生型拟南芥的技术，获得了超表达Zma006493转基因拟南芥植株，具有明显的抗逆功能。

技术领域

本发明属于作物遗传育种领域，具体涉及载体的构建和抗逆转基因植物的制备方法。

背景技术

干旱是影响作物生产的主要限制因素之一。我国每年因干旱造成粮食减产高达100亿公斤以上。因此，深入研究作物耐旱分子机制，对阐明作物干旱胁迫反应的机理及指导抗逆种质创新均具有重要的理论意义和实践价值。

一种逆境胁迫可以同时引发多种胁迫信号转导过程共同发生。不同信号途径通过其共有组分相互影响，最终构成一个庞大而复杂的逆境调控网络。植物在长期进化过程中分别从分子、细胞和植株整体水平上形成了应对外界不良环境的一系列应答机制。在分子水平上主要通过引发相关功能蛋白、活性氧清除酶基因等不同类型的应答基因共同作用来响应逆境胁迫；在细胞水平上，可以通过激素如ABA积累或调节气孔闭合降低植物失水速率、维持组织水势和含水量，也可以通过钙信号或活性氧信号来应答。在植株水平上，植物则通过增加根长和侧根数目等方式来适应外界干旱环境。

NAC转录因子是植物中特有的且数量众多的转录因子家族之一，其共同特点是其N端具有高度保守的NAC结构域，C端则为序列高度多样的转录调控区。其数量庞大，功能多样，抗逆分子机制复杂，在植物逆境胁迫中发挥重要作用，已成为现今研究的热点。经证实，NAC家族在大豆、鹰嘴豆、大麦、小麦、水稻、高粱和玉米等作物中广泛存在，并在植物生长发育、激素调节、应答逆境胁迫、病原虫害和机械损伤的过程中等中具有重要地位。但是从NAC家族组中筛选具有突出功能的基因及对其转化、利用等工作还存在很大空白，需要进一步深入研究。

发明内容

本发明的目的在于从玉米自交系B73中克隆出NAC家族成员Zma006493，利用农杆菌介导的蘸花法转化野生型拟南芥的技术，获得了超表达Zma006493转基因拟南芥植株，使其具有明显的抗逆功能。本发明的目的是通过以下技术方案实现的。

Zma006493基因的序列如序列表中SEQ ID NO:1所示，Zma006493基因应用于制备抗逆植物。

一种表达Zma006493的转基因拟南芥植株，所述转基因拟南芥植株包括Zma006493基因，Zma006493基因的序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。

一种超表达Zma006493转基因拟南芥植株的制备方法，包括以下制备步骤：Zma006493-pCambia3301过表达载体的构建和农杆菌介导的蘸花法转化野生型拟南芥两部分；

Zma006493-pCambia3301过表达载体的构建的具体步骤如下：

a.双酶切pCambia3301载体，酶切位点为：BglII，BstEII，获得植物表达载体；

b.通过DNA生物软件分析Zma006493全长序列，扩增带有与pCambia3301相同酶切位点的Zma006493片段，获得目的片段；

c.植物表达载体与目的片段重组获得重组连接产物；

d.将重组连接产物转化大肠杆菌感受态细胞，在含有Kan的平板上挑取单克隆菌斑进行菌液检测，测序正确后提取重组质粒；

农杆菌介导的蘸花法转化野生型拟南芥的具体步骤如下：

A.重组质粒通过农杆菌GV3101的转化，并初步筛选阳性单克隆菌斑；

B.PCR法鉴定阳性菌株；

C.蘸花法转化野生型拟南芥；