[发明专利]Zma006493基因的应用、表达Zma006493的转基因拟南芥植株及制备方法

权利要求书

1.Zma006493基因的应用，其特征在于：Zma006493基因的序列如序列表中SEQ ID NO:1所示，Zma006493基因应用于制备抗逆植物。

2.过表达Zma006493的转基因拟南芥植株，其特征在于：所述转基因拟南芥植株包括Zma006493基因，Zma006493基因的序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。

3.一种超表达Zma006493转基因拟南芥植株的制备方法，其特征在于：包括以下制备步骤：Zma006493-pCambia3301过表达载体的构建和农杆菌介导的蘸花法转化野生型拟南芥两部分；

Zma006493-pCambia3301过表达载体的构建的具体步骤如下：

a.双酶切pCambia3301载体，酶切位点为：BglII，BstEII，获得植物表达载体；

b.通过DNA生物软件分析Zma006493全长序列，扩增带有与pCambia3301相同酶切位点的Zma006493片段，获得目的片段；

c.植物表达载体与目的片段重组获得重组连接产物；

d.将重组连接产物转化大肠杆菌感受态细胞，在含有Kan的平板上挑取单克隆菌斑进行菌液检测，测序正确后提取重组质粒；

农杆菌介导的蘸花法转化野生型拟南芥的具体步骤如下：

A.重组质粒通过农杆菌GV3101的转化，并初步筛选阳性单克隆菌斑；

B.PCR法鉴定阳性菌株；

C.蘸花法转化野生型拟南芥；

D.PPT筛选转基因拟南芥阳性株系。

4.根据权利要求3所述的超表达Zma006493转基因拟南芥植株的制备方法，其特征在于：步骤b中：

以玉米B73 cDNA为模板，使用如序列表中SEQ ID NO:2所示的引物Zma006493-F和如序列表中SEQ ID NO:3所示的引物Zma006493-R进行目的片段的扩增；扩增产物切胶回收连PMD18-T载体测序，测序正确后提取质粒；再用如序列表中SEQ ID NO:4所示引物和如序列表中SEQ ID NO:5所示引物扩增带有酶切位点的Zma006493的片段。

5.根据权利要求4所述的超表达Zma006493转基因拟南芥植株的制备方法，其特征在于：步骤c中：

采用T4连接体系，该体系中各成分的体积比为：ddH₂O 1；pCambia3301酶切产物2；T4DNA Ligase 1；带酶切位点的目的片段5；10×连接Buffer 1；

反应条件：16℃过夜连接。

6.根据权利要求5所述的超表达Zma006493转基因拟南芥植株的制备方法，其特征在于：步骤d中具体包括大肠杆菌TOP10感受态细胞转化和提取重组质粒；

大肠杆菌TOP10感受态细胞转化包括以下步骤：

将全部连接体系加入体系5倍体积的TOP10感受态细胞中，冰上30min；

恒温水浴锅中42℃、90s，转于冰上2～5min；

加入无菌LB液体培养基，37℃，220rmp震荡培养约1h；

4000rmp离心5min收集菌体，吸取部分上清液，悬浮菌体并混匀，涂布于LB固体培养基上；

37℃倒置培养12-16h；

挑取白色单克隆于LBA液体培养基中，37℃，220rmp震荡培养4-6h。