[发明专利]一种磁微粒富集检测生物医学及环境标本新方法

说明书

本发明提供了一种磁微粒富集检测生物医学及环境标本新方法，该方法主要包括以下步骤：制备免疫磁珠：使用偶联方法将磁小体与SPA偶联，制得免疫磁珠；连接免疫磁珠和相应的抗体：将所述SPA的Bdomain与抗体非可变区FC端结合，制得结合抗体的免疫磁珠；富集：将生物医学及环境标本与连接相应的抗体的磁珠混合，富集与抗体对应的抗原；本发明提供的方法对生物医学及环境标本中抗原的富集效果好，优于合成磁珠。

技术领域

本发明属于医药技术领域，特别涉及一种磁微粒富集检测生物医学及环境标本新方法。

背景技术

随着人口数量和密度的增加，大规模爆发流行性传染病(瘟疫)的风险日益增加，近年，SARS、禽流感、新冠肺炎在我国的爆发，都体现了这种严峻的趋势，空气传播是流行性疾病最主要的传播途径，尽早、迅速、准确、简便、低成本、高通量地确诊感染者，是控制瘟疫爆发的关键，然而，要做到这一点却并非易事，在2019年新冠肺炎的疫情中，我们可以看到如下问题：

①感染者的隐蔽性强：有不少感染者在早期没有明显症状，但依然具有较强的传染性，他们进入人口聚集的区域后，往往会造成大范围感染，如何发现并确诊这类患者，目前还没有一种有效的方法；

②医院成了传染源：有症状但未经确诊的患者，在就医时缺乏防护措施，从而造成病原体的大量传播；

③医护工作者缺乏：由于瘟疫突然爆发、疫情蔓延迅速，患者急剧增加，使得医护工作者的数量严重不足；同时，在诊疗过程中，大量医护工作者的感染，又加剧了这一状况；

④医疗资源缺乏：由于患者数量暴增，原有的病房、医疗器械、防护装备等资源严重不足；

⑤确诊速度缓慢：对于新发现的病毒，由于还没有相应的抗体，只能进行核酸检测，而核酸检测的灵敏度较低、假阴性比例高，有的病人甚至到第六次检测才确定为阳性，大大延误了确诊时间；

⑥取样部位尚未确定：新病毒在患者体内的分布规律还没有完全掌握，因此很难做到准确取样，而取样部位的准确与否，直接关系到检测结果的可靠性，虽然知道新冠病毒集中于肺部，但肺泡灌洗液操作复杂，需要特殊设备，很难进行高通量检测；而咽拭子等方法虽然简单、快速，但采集的病毒量小，依然有较高的假阴性比例。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明提供了一种磁微粒富集检测生物医学及环境标本新方法，该方法主要包括以下步骤：

制备免疫磁珠：使用偶联方法将磁小体与SPA偶联，制得免疫磁珠；

连接免疫磁珠和相应的抗体：将SPA的Bdomain与抗体非可变区FC端结合，制得结合抗体的免疫磁珠；

富集：将生物医学及环境标本与连接相应的抗体的磁珠混合，富集与抗体对应的抗原。

进一步地，SPA为SPA重组蛋白，该SPA重组蛋白的序列如下：

GGATCC CGSGSGSADNKFNKEQQNAFYEILHLPNLTEEQRNAAIQSLKDDPSQSANLLAEAKKLNDAQAPKGSGSGSADNKFNKEQQNAFYEILHLPNLTEEQRNAAIQSLKDDPSQSANLLAEAKKLNDAQAPKAAGCTT。

进一步地，SPA重组蛋白是在对来自金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus的SPA基因的结构进行改造的基础上进行的，重组蛋白的合成方法包括以下步骤：

(a)在天然SPA基因的B domain的N端添加一个半胱氨酸引入巯基；

(b)在引入巯基的SPA基因的两端分别添加BamHⅠ与HindⅢ酶切位点；

(c)将步骤(b)的SPA基因克隆进入PET28(a+)载体，并转化进入E·coli BL21内；