[发明专利]一种用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的CRISPR核酸检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测新型冠状病毒(2019‑nCoV)的CRISPR核酸检测试剂盒。本发明提供一种用于检测新型冠状病毒的试剂盒，包括用于检测新型冠状病毒的CRISPR‑Cas13a系统和与其配套使用的侧向流试纸；a1)单独包装的crRNA和LwCas13a蛋白；a2)报告RNA，其由20个U组成；a3)用于扩增待测样本靶点序列的RT‑RAA扩增引物，且所述RT‑RAA扩增引物中的一条引物的5'末端具有被T7 RNA聚合酶识别的区域；本发明的CRISPR核酸检测试纸可通过CRISPR‑Cas13a系统实现对新型冠状病毒核酸的高灵敏、高特异、便捷检测，灵敏度达到10copies/test。

技术领域

本发明涉及一种用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的CRISPR核酸检测试剂盒，属于分子诊断技术领域。

背景技术

新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID-19)是由新型冠状病毒(2019-nCoV)引起、导致人类发生急性感染的乙类传染病，具有传染性强、临床救治 能力薄弱、无批准上市的特效药物及无疫苗预防的特点。新型冠状病毒的检测技术包 括病毒基因测序、IgM和IgG抗体的检测、荧光定量PCR、恒温扩增芯片核酸检测技 术等。然而现有检测技术均存在一定的不足，胶体金法简单便携，但灵敏度不足；包 括LAMP、RPA在内的恒温扩增法灵敏度很高，但在操作过程中易污染；荧光定量PCR法 和病毒基因测序稳定、可靠、具有一定的灵敏度，但样本处理复杂，且对仪器要求高。

2017年4月，美国研究人员建立了一种灵敏度达到埃摩级(单拷贝)，特异性达 到单碱基的核酸检测技术——基于CRISPR-Cas13a的核酸检测平台SHERLOCK(Specific HighSensitivity Enzymatic Reporter UnLOCKing)，利用Leptotrichia wadei Cas13a蛋白(LwCas13a)的非特异剪切活性，结合可以高效扩增目的片段的重组聚合酶扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)，实现了对痕量核酸快速、廉价、高 灵敏的检测。2018年4月，美国研究人员将以上技术运用到社区现场检测中，发明了 一种侧向流试纸，通过显线法显示目的核酸的存在，使此技术更加便捷。

发明内容

本发明一个目的是提供一种用于检测新型冠状病毒的试剂盒。

本发明提供的试剂盒，包括用于检测新型冠状病毒的CRISPR-Cas13a系统和与其配 套使用的侧向流试纸；

所述用于检测新型冠状病毒的CRISPR-Cas13a系统包括如下a1)-a3)；

a1)单独包装的crRNA和LwCas13a蛋白(氨基酸序列为序列6)，或crRNA和LwCas13a蛋白复合体；

所述crRNA的靶点序列为序列1；

a2)报告RNA，其由20个U组成，且所述报告RNA的序列两端分别标记FAM和生物素；

a3)用于扩增待测样本靶点序列的RT-RAA扩增引物，且所述RT-RAA扩增引物中的一条引物的5'末端具有被T7 RNA聚合酶识别的区域；

所述侧向流试纸依次包括样品板(含有加样孔)、与纳米金抗FITC抗体、链亲和素线、抗体捕获线和吸收板；

所述抗体捕获线包被的抗体为羊抗兔IgG。

更进一步的，所述CRISPR-Cas13a系统还包括用于特异性扩增新型冠状病毒靶点序列的其他试剂，所述用于特异性扩增新型冠状病毒靶点序列的其他试剂包括如下试 剂中的全部或部分：NTP(如NTP Mix)、T7 RNA聚合酶、RNA酶抑制剂、MgCl₂溶液、 HEPES缓冲液、RNase free water，具体见实施例中的表7中组分。