[发明专利]一种用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的CRISPR核酸检测试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测新型冠状病毒的试剂盒，包括用于检测新型冠状病毒的CRISPR-Cas13a系统和与其配套使用的侧向流试纸；

所述用于检测新型冠状病毒的CRISPR-Cas13a系统包括如下a1)-a3)；

a1)单独包装的crRNA和LwCas13a蛋白，或crRNA和LwCas13a蛋白复合体；

所述crRNA的靶点序列为序列1；

a2)报告RNA，其由20个U组成，且所述报告RNA的序列两端分别标记FAM和生物素；

a3)用于扩增待测样本靶点序列的RT-RAA扩增引物，且所述RT-RAA扩增引物中的一条引物的5'末端具有被T7 RNA聚合酶识别的区域；

所述基于消线法的侧向流试纸依次包括样品板、与纳米金抗FITC抗体、链亲和素线、抗体捕获线和吸收板；

所述抗体捕获线包被的抗体为羊抗兔IgG；

所述crRNA的核苷酸序列为序列2；所述RT-RAA扩增引物由序列4所示的单链DNA分子和序列5所示的单链DNA分子组成。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述CRISPR-Cas13a系统还包括a4)RNA聚合酶。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：

所述试剂盒还包括记载如下检测方法的可读载体：

所述检测方法包括如下步骤:

b1、提取待测样本的核酸，所述RT-RAA扩增所需引物对待测样品核酸进行RT-RAA扩增，得到RT-RAA扩增产物；

b2、将所述RT-RAA扩增产物、所述crRNA、所述LwCas13a蛋白在含有所述报告RNA的体系中反应，得到反应产物；

b3、将所述反应产物加入所述试纸条的样品板的加样孔中，静置观察；

若试纸没有T线显现且有C线显现，则待测样本含有或候选含有新型冠状病毒；若试纸有T线显现且有C线显现，则待测样本不含有或候选不含有新型冠状病毒。

4.权利要求1-3中任一所述试剂盒中的用于检测新型冠状病毒的CRISPR-Cas13a系统；

所述用于检测新型冠状病毒的CRISPR-Cas13a系统包括如下a1)-a3)；

a1)单独包装的crRNA和LwCas13a蛋白，或crRNA和LwCas13a蛋白复合体；

所述crRNA的靶点序列为序列1；

a2)报告RNA，其由20个U组成，且所述报告RNA的序列两端分别标记FAM和生物素；

a3)用于扩增待测样本靶点序列的RT-RAA扩增引物，且所述RT-RAA扩增引物中的一条引物的5'末端具有被T7 RNA聚合酶识别的区域；

所述crRNA的核苷酸序列为序列2；

所述RT-RAA扩增引物由序列4所示的单链DNA分子和序列5所示的单链DNA分子组成。

5.权利要求1-3中任一所述试剂盒或权利要求4中的CRISPR-Cas13a系统或所述系统中的单独包装的crRNA和LwCas13a蛋白，或crRNA和LwCas13a蛋白复合体在如下c1-c5任一中的应用：

c1)制备检测或辅助检测新型冠状病毒产品；

c2)制备检测或辅助检测新型冠状病毒核酸产品；

c3)制备检测或辅助检测待测样本中是否含有新型冠状病毒产品；

c4)制备检测或辅助检测待测样本中是否含有新型冠状病毒核酸产品；

c5)制备筛选或辅助筛选新型冠状病毒防治药物产品。

6.一种检测或辅助检测新型冠状病毒核酸的方法，所述方法为非疾病诊断治疗方包括如下步骤：

b1、提取待测样本的核酸，所述RT-RAA扩增所需引物对待测样品核酸进行RT-RAA扩增，得到RT-RAA扩增产物；

b2、将所述RT-RAA扩增产物、所述crRNA、所述LwCas13a蛋白在含有所述报告RNA的体系中反应，得到反应产物；

b3、将所述反应产物加入所述试纸条的样品板的加样孔中，静置观察；

若试纸没有T线显现且有C线显现，则待测样本含有或候选含有新型冠状病毒；若试纸有T线显现且有C线显现，则待测样本不含有或候选不含有新型冠状病毒。