[发明专利]一种检测弓形虫IgG抗体的酶联免疫试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种检测弓形虫IgG抗体的酶联免疫试剂盒及方法。本发明提供的检测弓形虫的间接酶联免疫试剂盒包括如下：抗原TgGRA54蛋白和包被液、或抗原TgGRA54蛋白溶液和包被液、或包被TgGRA54蛋白的酶标板；所述TgGRA54蛋白为如下a或b或c：a)序列表中序列2所示的蛋白质；b)序列表中序列2第35‑416位氨基酸所示的蛋白质；c)将a)或b)所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由a)或b)衍生的蛋白质。本发明采用TgGRA54蛋白可用于临床上大批量弓形虫病的诊断，用其作为抗原制备间接酶联免疫试剂盒，其检测效果好，快速简便，特异性好。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种检测弓形虫IgG抗体的酶联免疫试剂盒及方法。

背景技术

弓形虫在世界范围内分布广泛，是一种属于顶复亚门孢子虫纲真球虫目的专性胞内原虫，引起的弓形虫病是危害人畜健康和经济发展的人兽共患病之一。弓形虫宿主种类十分广泛，几乎能感染所有的温血动物和部分冷血动物。我国饲养的动物和宠物中，都存在一定的感染率。其中，动物弓形虫感染中最常见的是猪，感染率为7.19％-75.95％，多数省份感染率在20％-40％，地区之间感染率差异较大。我国牛弓形虫感染率为0％-52.50％，山羊弓形虫感染率为1.4％-29.86％，可引起羊只流产或产弱羔及木乃伊胎。牛羊肉是中国人消费的主要肉品之一，因此，在牛和羊等牲畜的检疫工作中，准确的检疫和科学的处理可大大减少因弓形虫病造成的人畜健康问题和经济损失。

弓形虫的感染没有明显的临床症状，仅依靠发病症状的诊断并不可靠。目前诊断弓形虫病的方法主要有病原学检测、分子生物学检测和血清学检测。病原学诊断方法涉及到对虫株的分离，试验周期长，不适合用于大批量临床样本的检测。分子生物学诊断方法一般依靠特定的核酸序列扩增和其它一些新兴的技术，费用昂贵，不适合在临床上推广。血清学诊断方法具有准确、便捷、快速等优点，目前是临床上常用的诊断方法。其中IFA一般认为是血清学诊断的金标准，ELISA方法相较于其它试验检测弓形虫IgG抗体的敏感性和特异性较高，而且易于商品化和自动化，适合弓形虫IgG抗体筛查，因此受到广泛关注。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测弓形虫的间接酶联免疫试剂盒。

本发明提供的试剂盒，包括如下：

1)、抗原TgGRA54蛋白和包被液、或抗原TgGRA54蛋白溶液和包被液、或包被TgGRA54蛋白的酶标板；

所述TgGRA54蛋白为如下a或b或c：

a)序列表中序列2所示的蛋白质；

b)序列表中序列2第35-416位氨基酸所示的蛋白质；

c)将a)或b)所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由a)或b)衍生的蛋白质。

上述试剂盒中，所述抗原TgGRA54蛋白或所述抗原TgGRA54蛋白溶液的包被浓度为2.5μg/mL；

或所述包被TgGRA54蛋白的酶标板中每孔TgGRA54蛋白含量为0.25μg。

上述包被液为将抗原TgGRA54蛋白或抗原TgGRA54蛋白溶液稀释为2.5μg/mL的包被浓度的溶液，具体采用Tris-HCl缓冲液。

上述试剂盒，还包括如下：

2)封闭液：体积百分含量为5％的马血清溶液；

3)用于稀释待测样品或血清标准品的稀释液；所述稀释液为封闭液；

4)结合待测样品的酶标二抗，在本发明的实施例中具体为HRP标记兔抗牛IgG抗体；

5)显色液；