[发明专利]一种检测包虫病诊断的试剂盒

权利要求书

1.一种检测包虫病诊断的试剂盒，其特征在于：其原料组成按重量份比包括：上游引物Eg-F2-4份、下游引物Eg-R2-4份、dNTp混合物3-5份、DNA聚合酶1-3份、Taq酶1-3份、三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液2-4份和无菌双蒸水6-8份。

2.根据权利要求1所述的一种检测包虫病诊断的试剂盒，其特征在于：其原料组成按重量份比包括：上游引物Eg-F2份、下游引物Eg-R2份、dNTp混合物3份、DNA聚合酶1份、Taq酶1份、三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液2份和无菌双蒸水6份。

3.根据权利要求1所述的一种检测包虫病诊断的试剂盒，其特征在于：其原料组成按重量份比包括：上游引物Eg-F4份、下游引物Eg-R4份、dNTp混合物5份、DNA聚合酶3份、Taq酶3份、三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液4份和无菌双蒸水8份。

4.根据权利要求1所述的一种检测包虫病诊断的试剂盒，其特征在于：其原料组成按重量份比包括：上游引物Eg-F3份、下游引物Eg-R3份、dNTp混合物4份、DNA聚合酶2份、Taq酶2份、三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液3份和无菌双蒸水7份。

5.根据权利要求1-4任意一项所述的一种检测包虫病诊断的试剂盒，其特征在于：所述上游引物Eg-F为5′-CTCTTTGATGTCACGCACGATTTC-3′，所述下游引物Eg-R为5′-ATCGTGGGCCGCTCTAGGCACC-3′，并且上游引物Eg-F与下游引物Eg-R的浓度均为10pmol/μL。

6.根据权利要求1-4任意一项所述的一种检测包虫病诊断的试剂盒，其特征在于：所述DNA聚合酶为耐热DNA聚合酶，并且耐热DNA聚合酶中的酶活性为2-6U/μL，耐热DNA聚合酶为化学修饰的热启动耐热DNA酶、抗体修饰的热启动耐热DNA酶中的一种或多种组合。

7.根据权利要求1-4任意一项所述的一种检测包虫病诊断的试剂盒，其特征在于：所述三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液的浓度为6mol/L，并且三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液的pH＝8.5。

8.根据权利要求1-4任意一项所述的一种检测包虫病诊断的试剂盒，其特征在于：操作试剂盒检测包虫病具体包括以下步骤：

S1、取待检虫体组织或人体、动物感染病灶3g放入含2ml保存液的试管中，充分混合后，采用2500转/分钟的速率离心10分钟，提取样本的全基因组DNA放置在PCR反应管中备用；

S2、向S1中存放有样本全基因组DNA的PCR反应管中加入上游引物Eg-F、下游引物Eg-R、DNA聚合酶、Taq酶、三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液和无菌双蒸水，充分混合；

S3、将S2中的PCR反应管放置在PCR仪中进行PCR扩增，扩增的PCR产物点样至3％的琼脂糖凝胶中进行电泳，观察电泳结果，其中PCR的反应条件为94℃预变性3min，94℃变性35s，54℃退火35s，70℃延伸50s，共30个循环，72℃延伸6min；

S4、对S3中的电泳结果进行分析，若扩增产物条带长度为811bp，则判定为包虫病感染阳性，若扩增产物无条带，则判定为阴性。