[发明专利]一种基于表面等离子共振技术的抗体生物活性检测方法

权利要求书

1.一种基于表面等离子共振技术的抗体生物活性检测方法，其特征在于，其步骤如下：

选用LAG3受体高表达的人Burkitt's淋巴瘤细胞株Daudi细胞与C1芯片结合，固定于芯片表面；当LAG3与芯片表面细胞结合，通过生物大分子相互作用仪Biacore T200捕捉响应信号；当加入抗LAG3抗体时，LAG3与细胞结合减少，响应值降低，通过比较响应值实现细胞水平的抗体活性进而实现快速检测；

仪器温度设置为25℃，芯片C1芯片，上样速度为10μl/min，结合时间为10s，芯片再生条件为以pH1.5浓度为10mmol/L的盐酸甘氨酸溶液以30μl/min的流速再生30s。

2.根据权利要求1所述的一种基于表面等离子共振技术的抗体生物活性检测方法，其特征在于：先以人LAG3胞外区蛋白的cDNA为模板，PCR扩增LAG3胞外区蛋白的基因片段，克隆至表达载体pTT5上，实现LAG3胞外区蛋白重组表达质粒的构建；

再将上述构建得到的人LAG3胞外区蛋白重组载体转染至HEK293细胞中进行蛋白瞬时表达；收集表达后的细胞上清，用镍离子亲和柱及分子排阻层析柱Superdex 200，GE公司产品，进行分离纯化，得到的人LAG3胞外区蛋白用于后续的检测方法分析。

3.根据权利要求2所述的一种基于表面等离子共振技术的抗体生物活性检测方法，其特征在于：先以抗LAG3单克隆抗体relatlimab的cDNA为模板，PCR扩增抗LAG3单克隆抗体的基因片段，克隆至表达载体pTT5上，实现抗LAG3单克隆抗体重组表达质粒的构建；

再将上述构建得到的抗LAG3单克隆抗体relatlimab重组载体转染至HEK293细胞中进行蛋白瞬时表达；收集表达后的细胞上清，用镍离子亲和柱及分子排阻层析柱Superdex200进行分离纯化，得到的抗LAG3单克隆抗体relatlimab用于后续的检测方法分析。

4.根据权利要求3所述的一种基于表面等离子共振技术的抗体生物活性检测方法，其特征在于：Daudi细胞用含10％FBS的RPMI-1640培养基，在37℃和5％二氧化碳的条件下培养至对数期，将Daudi细胞收集，PBS清洗两次后，使用HBS缓冲液将细胞重悬至2×105cells/ml的密度，300μl/管分装于无菌0.5mlEP管中待测；

将重组蛋白分为3组：第一组为阴性对照组，无任何添加的HBS缓冲液；第二组加入终浓度为10μg/ml的LAG3胞外区蛋白；第三组加入终浓度为10μg/ml的LAG3胞外区蛋白和600nM/100nM/30nM的抗LAG3单克隆抗体relatlimab；37℃孵育10min后上机检测即可。

5.权利要求1-3任意一项所述的一种基于表面等离子共振技术的抗体生物活性检测方法，在免疫检查点靶点的抗体药物筛选或批次放行或稳定性监测或工艺开发过程中的应用。