[发明专利]一种海藻中氨基糖、中性糖和糖醛酸同时快速检测的方法

说明书

本发明公开了一种海藻中氨基糖、中性糖和糖醛酸同时快速检测的方法，属于食品工业中糖类化合物的分析检测技术领域。本发明方法为：待测样品采用超声辅助水提醇沉的方法提取海藻多糖粗品；利用Sevage法去除提取的海藻多糖粗品中的蛋白后，采用三氟乙酸水解海藻多糖；水解完成后加入NaOH中和水解液的酸度，过0.22μm滤膜后用于离子色谱‑脉冲安培检测器检测。本发明前处理方法简单快速，无需衍生，大幅提高方法的适用性、回收率，解决了目前采用多种检测技术、多种仪器、多种前处理方法进行多种组分测定时效率低的技术难题，大幅提高了检测效率，降低了检测成本。

技术领域

本发明属于食品工业中糖类化合物的分析检测技术领域，具体涉及一种海藻中氨基糖、中性糖和糖醛酸同时快速检测的方法。

背景技术

当今世界已经进入资源环境瓶颈期，开发海洋资源为可持续发展的战略选择。海洋生物相比于陆地生物具有独特的优势。我国海洋资源丰富，海藻加工及其高值化利用成为我国海洋资源综合利用的重要领域。海藻多糖在降血脂、抗氧化、抗凝血、抗肿瘤、抗疲劳、抗炎、免疫调节和神经保护作用等方面具有显著效用，在生物化学、保健食品及临床医学等领域的应用也越来越受到重视。在欧美、日本等国家，褐藻糖胶已作为保健品在市场上广泛流通；近年来，国内市场也涌现出多种形式的褐藻糖胶产品。但目前关于海藻多糖的单糖和寡糖组成、结构特征等尚未明确，影响了海藻多糖产品的开发和市场推广。海藻多糖的生物学活性与其糖类组成密不可分。多糖的生物活性与其糖类组成密切相关，因此研究多糖的糖类组成对研究其生物活性有重要意义。海藻多糖中单糖种类繁多，定性定量工作极具挑战。单糖是一种含有多羟基的亲水性大分子，为多羟基醛、酮及其衍生物，由于其极性大、无紫外和荧光基团、结构相似，很多互为同分异构体，所以海藻多糖的单糖分离及定量分析极具挑战，成为制约糖类生物活性研究及应用的瓶颈。

目前，糖类的检测方法主要有：液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法和离子色谱法等。液相色谱检测糖类化合物分为两种模式：非衍生化的直接检测法和衍生化后的检测法。各种糖类检测方法之间的比较详见表1。直接检测的液相色谱法操作简便，但检测灵敏度低、重现性较差；衍生化的液相色谱法提高了检测灵敏度和重现性，但是衍生过程操作繁琐，耗时，且在衍生过程会不可避免的造成误差，不适用于常规的食品工业中糖类检测的应用。气相色谱法同样需要对糖类化合物进行衍生化处理，衍生化操作常需要多种试剂，操作繁琐，定量的重复性差。毛细管电泳利用极细内径的色谱柱来分离单糖，在复杂的单糖的分离度具有独特优势，但由于其色谱柱极细的内径和极低的样品注射量，导致检测灵敏度较低，对于含量较少的样品的检测具有不适用。离子色谱法检测单糖具有灵敏度高、分离度高、前处理操作简便、样品用量少等优点，适用于常规食品工业中的单糖检测，但是HPAEC在色谱系统稳定性方面一直存在问题。

表1糖类不同检测方法的比较

针对于HPAEC-PAD方法，现有技术中“定量测定褐藻(海带科)碳水化合物成分的方法”(Methodology for quantitative determination of the carbohydratecomposition of brown seaweeds(Laminariaceae)，DOI:10.1039/C4RA03537B(Paper)RSCAdv.,2014,4,25736-25746)公开了海带中中性糖、糖醛酸总含量、灰分、水分的测定；其针对的糖类为：岩藻糖、葡萄糖、甘露醇、古罗糖醛酸、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸等6种；并采用两步水解法进行样品的前处理；该文献中关于糖类的检测侧重于中性糖和糖醛酸总量的测定，而且没有糖类检测的相关方法学验证的报道。海藻中含有大量的蛋白质，蛋白质的存在污染色谱柱，影响分离效果，降低柱效，该文献的样品前处理并未对蛋白杂质进行去除；此外，该文献中检测的糖的种类也较少；因而，亟需一种同时检测多种糖类、无需衍生化处理、检测结果精确、稳定性高的糖类检测方法。

发明内容