[发明专利]一种可视化布鲁氏菌种间鉴定检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种可视化布鲁氏菌种间鉴定检测试剂盒。本发明所述试剂盒，包括含混合体系的八联管、ddH₂O和阳性质控模板；所述混合体系包括PCR Mix、引物对和SYBR Green Ⅰ；所述八联管中每管各含一对不同的引物。本发明所述试剂盒能够应用于不同种布鲁氏菌的种间鉴定检测，实现对PCR产物进行快速、简便、可视化检测。

技术领域

本发明涉及布鲁氏菌科学研究及种属检测鉴定技术领域，具体涉及一种可视化布鲁氏菌种间鉴定检测试剂盒。

背景技术

布鲁氏菌病作为一种人兽共患病，严重危害我国畜牧业的发展，并引发严重的社会公共卫生问题，由于不同种布鲁氏菌的宿主嗜性不同，对人和动物的致病力也不同，快速准确对病原体进行鉴定对我国布鲁氏菌病的防控与净化有重要意义。基于分子生物学中的PCR技术能够特异性对布鲁氏菌核酸进行大量扩增和鉴定，同时能鉴别不同种的布鲁氏菌。相比于分离鉴定及免疫学方法，PCR诊断特异性强，灵敏度高，在核酸检测领域具有重要地位。

然而，传统的分子生物学及免疫学诊断方法很难实现布鲁氏菌现场检测的应用，首先是检测时间偏长，结果判定检测操作过程较为复杂，在临床应用中受到了限制，涉及到核酸分子的扩增电泳检测、免疫学方法的酶标仪定量定性检测，以及假阳性的出现，都不适合现场检测，而且也不能鉴别不同种布鲁氏菌。如何简化操作流程，节省检测时间，实现布鲁氏菌现场检测，同时完成布鲁氏菌分种鉴定，对我国布病的防控具有重要意义。其次，目前PCR检测多为单重体系和多重PCR体系，以AMOS-PCR为主，检测的种型较少，并且检测结果必须借助琼脂糖凝胶电泳才能对种型进行判定。但是，目前有12个种布鲁氏菌的研究报道，这些检测方法都不能对布病的现场防控及净化提供合理有效的手段，目前国内外对布鲁氏菌的检测方法有很多种，它们各有优缺点，检测技术包括传统的细菌分离培养法、免疫学检测技术以及新兴的分子生物学技术。以核酸为基础的分子检测方法以其快速、灵敏、特异以及省时省力的特点，成为布病病原体检测的革命性技术。布鲁氏菌Bruce-Ladder检测方法为一种多重PCR技术，是指在同一反应体系中，加入多对特异性引物，通过琼脂糖凝胶电泳检测，根据不同种布鲁氏菌PCR扩增出现的不同核酸电泳带型区分菌种类型。但如何简化该技术复杂的操作和结果判定过程，同时能够适用于现场快速确定病原类型，一直困扰研究人员。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可视化布鲁氏菌种间鉴定检测试剂盒。本发明所述试剂盒能够应用于不同种布鲁氏菌的种间鉴定检测，实现对PCR产物进行快速、简便、可视化检测。

本发明提供了一种可视化布鲁氏菌种间鉴定检测试剂盒，包括含混合体系的八联管、ddH₂O和阳性质控模板；所述混合体系包括PCR Mix、引物对和SYBR GreenⅠ；所述八联管中每管各含一对不同的引物。

优选的是，所述混合体系包括PCR液体混合体系、浓缩的半液态胶冻样混合体系和浓缩干燥混合体系。

优选的是，所述引物对包含8对引物：

引物对1的正向引物和反向引物的和核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ IDNO:2所示；

引物对2的正向引物和反向引物的和核苷酸序列分别如SEQ ID NO:3和SEQ IDNO:4所示；

引物对3的正向引物和反向引物的和核苷酸序列分别如SEQ ID NO:5和SEQ IDNO:6所示；

引物对4的正向引物和反向引物的和核苷酸序列分别如SEQ ID NO:7和SEQ IDNO:8所示；

引物对5的正向引物和反向引物的和核苷酸序列分别如SEQ ID NO:9和SEQ IDNO:10所示；

引物对6的正向引物和反向引物的和核苷酸序列分别如SEQ ID NO:11和SEQ IDNO:12所示；