[发明专利]一种可视化布鲁氏菌种间鉴定检测试剂盒

权利要求书

1.一种可视化布鲁氏菌种间鉴定检测试剂盒，包括含混合体系的八联管、ddH₂O和阳性质控模板；所述混合体系包括PCRMix、引物对和SYBR GreenⅠ；所述八联管中每管各含一对不同的引物。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述混合体系包括PCR液体混合体系、浓缩的半液态胶冻样混合体系和浓缩干燥混合体系。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述引物对包含8对引物：

引物对1的正向引物和反向引物的和核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示；

引物对2的正向引物和反向引物的和核苷酸序列分别如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示；

引物对3的正向引物和反向引物的和核苷酸序列分别如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示；

引物对4的正向引物和反向引物的和核苷酸序列分别如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示；

引物对5的正向引物和反向引物的和核苷酸序列分别如SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示；

引物对6的正向引物和反向引物的和核苷酸序列分别如SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示；

引物对7的正向引物和反向引物的和核苷酸序列分别如SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示；

引物对8的正向引物和反向引物的和核苷酸序列分别如SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16所示。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR Mix包括0.1U/μLTaq DNA聚合酶、3mM Mg²⁺、400μM dNTPs和2×PCR Buffer。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述混合体系中PCR Mix和引物对的制备用原料的体积比为10:2。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，以10μLPCR Mix为基准，所述SYBR GreenⅠ的制备用原料为0.5～2μL的50×SYBR GreenⅠ。

7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于，所述混合体系的制备方法包括以下步骤：

将PCR Mix分别与8对引物的每一对引物混合，然后分别加入SYBR GreenⅠ的干燥物，得到8种PCR液体混合体系；

或将PCR Mix分别与8对引物的每一对引物混合，进行浓缩，然后分别加入SYBR GreenⅠ的干燥物，得到8种浓缩的半液态胶冻样混合体系；

或将PCR Mix分别与8对引物的每一对引物混合，进行浓缩干燥，然后分别加入SYBRGreenⅠ的干燥物，得到8种浓缩干燥混合体系。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性质控模板为插入各引物对扩增目的DNA片段的重组质粒。

9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒检测鉴定的布鲁氏菌包括牛种布鲁氏菌、羊种布鲁氏菌、绵羊附睾种布鲁氏菌、猪种布鲁氏菌、牛种布鲁氏菌疫苗株S19、牛种布鲁氏菌疫苗株RB51、羊种布鲁氏菌疫苗株Rev1、犬种布鲁氏菌、沙林鼠种布鲁氏菌、海洋种布鲁氏菌、田鼠种布鲁氏菌和岐见玛瑙宝螺种布鲁氏菌。