[发明专利]鳜鱼蛋白源的含半胱氨酸肽及其制备方法、含半胱氨酸肽-锌螯合物及其制备方法和应用

说明书

本发明属于食品生物技术领域，具体涉及鳜鱼蛋白源的含半胱氨酸肽及其制备方法，以及含半胱氨酸肽‑锌螯合物及其制备方法和应用。本发明通过运用植物油料(大豆、花生和菜籽)以及鳜鱼中的蛋白质为底物，分别制备不同来源的含半胱氨酸肽(Cys‑containing peptide，CCP)，其中相对于鳜鱼来说，鳜鱼来源的CCP为同源型，植物油料来源的CCP为异源型。对同源CPP和异源CCP进行复配制备其螯合物，或同源CCP‑Zn螯合物和异源CCP‑Zn螯合物的混合物，通过运用这两类螯和物能够有效提升鳜鱼的保鲜效果，延长了鳜鱼的食用期限。

技术领域

本发明属于食品生物技术领域，具体涉及鳜鱼蛋白源的含半胱氨酸肽及其制备方法，以及含半胱氨酸肽-锌螯合物及其制备方法和应用。

背景技术

多肽金属螯合物是由金属离子与多肽配位结合形成的一类具有环状结构的物质，其具有促进微量元素吸收、抗氧化等多种生理活性。近年来，随着研究的不断深入，多肽金属螯合物又被证明具有较好的抑菌活性。肽锌螯合物是蛋白水解产生的锌螯和肽与锌离子发生螯和反应制成的螯和产物。有研究成果指出，肽锌螯和物的抑菌作用有利于促进针对草鱼的保鲜效果。鳜鱼(Siniperca chuatsi)属鲈形目鮨科、鳜亚科、鳜属，是我国名贵食用鱼类，广泛分布于我国主要江河湖泊中。近年来，全国鳜鱼主产区的年产量已超过30万吨，且消费者对鳜鱼的需求量逐年提升。传统的鳜鱼保鲜技术，保鲜期限短，保鲜值低下，大大降低了鳜鱼的食用效果。因此，亟待开发对于鳜鱼具有保鲜效果的新物质及其新技术。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了鳜鱼蛋白源的含半胱氨酸肽及其制备方法，并通过鳜鱼蛋白源的含半胱氨酸肽制备获得含半胱氨酸肽-锌螯合物，以解决现有技术中鳜鱼保鲜技术，保鲜期限短，保鲜值低下，大大降低了鳜鱼的食用效果的技术问题。

本发明提供的鳜鱼蛋白源的含半胱氨酸肽的制备方法，具体技术方案如下：

鳜鱼蛋白源的含半胱氨酸肽的制备方法，包括如下步骤：

S1，将鳜鱼蛋白配置浓度为12-20％鳜鱼蛋白液，倒入发酵罐中，按3％-8％接种量分别接种清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei，乳杆菌属，清酒乳杆菌种，购自“科汉森”公司，商品名B-2SafePro)和腐生葡萄球菌(于2019年7月1日保藏在广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 60709)，发酵温度设为20-40℃，发酵时间为3-7d，获得鳜鱼蛋白发酵液；

S2，将步骤S1中的鳜鱼蛋白发酵液进行灭菌和过滤，取滤液，将所述滤液放置于-18℃冷冻24h，再于4-10℃解冻24h，解冻液进行离心，去除沉淀，取上层清液，将所述上清液旋转蒸发、浓缩后、冷冻干燥，获得鳜鱼蛋白肽粗粉；

S3，将步骤S2中的鳜鱼蛋白肽粗粉进行亲和柱层析，获得鳜鱼蛋白源的含半胱氨酸肽。

在某些实施方式中，步骤S2中，所述灭菌温度为121℃，灭菌时间为30min；所述过滤采用2层滤纸或8层纱布；所述离心的转速为3000-5000转/分钟，所述离心时间为10-20min。

在某些实施方式中，步骤S3中，亲和填料包括螯合琼脂糖凝胶、高效亲和琼脂糖凝胶、琼脂糖亲和介质、金属镍螯合琼脂糖凝胶；所述亲和填料与锌离子结合，生成琼脂糖-锌填料，之后装柱，获得亲和柱，采用检测波长为220nm；平衡液为pH7.4的水溶液；洗脱液为pH3.5的水溶液，将所述鳜鱼蛋白肽粗粉溶于pH7.4的水溶液，浓度为40-100mg/mL，上样量为柱体积的2-3％，采用平衡液洗3个柱体积，去除未螯和的肽，再采用洗脱液洗脱，收集洗脱液，即为所述鳜鱼蛋白源的含半胱氨酸肽。

如上所述的制备方法获得的鳜鱼蛋白源的含半胱氨酸肽。

本发明通过上述的鳜鱼蛋白源的含半胱氨酸肽，还提供了两种含半胱氨酸肽-锌螯合物的制备方法的技术方案。

方案一：含半胱氨酸肽-锌螯合物的制备方法，包括如下步骤：