[发明专利]一种萜酚有关物质的HPLC-PDA检测方法

说明书

本发明公开了一种萜酚有关物质的HPLC‑PDA检测方法，采用色谱条件如下：色谱柱采用反相C18色谱柱；流动相包括流动相A与流动相B，流动相A为乙腈，流动相B为水；采用梯度洗脱，梯度洗脱程序按以下程序进行：0‑10分钟，流动相A与流动相B的体积比由10:90线性变化为60:40；10‑30分钟，流动相A与流动相B的体积比由60:40线性变化为80:20；30‑34分钟，流动相A与流动相B的体积比由80:20线性变化为81:19；34‑40分钟，流动相A与流动相B的体积比由81:19线性变化为100:0，并维持该体积比至60分钟。采用本发明方法的条件，主峰与相邻杂质峰能完全分离，各主要降解杂质峰之间也能完全分离，且主峰纯度高，杂质检出率高于现有方法。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种萜酚有关物质的HPLC-PDA检测方法。

背景技术

高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上发展起来的一种新的色谱技术。HPLC不受样品挥发度和热稳定性的限制，几乎能够分析所有的有机、高分子及生物试样，并且它具有高柱效、高选择性、分析速度快、灵敏度高、重复性好、样品量少、应用范围广、自动化等优点。该法已成为现代分析技术的重要手段之一。

美国药典方法(USP)条件为：色谱柱：填料L1(十八烷基键合多孔硅胶，简称：ODS)，4μm，4.6x150mm；HPLC检测波长：228nm；流速：1mL/min；柱温：20℃；流动相：甲醇:水:四氢呋喃:乙腈＝45:25:20:10(必要时进行微调)，0.45μm滤膜过滤并脱气；系统适用性溶液：精密量取一定体积的USPΔ9-萜酚RS和USP Exo-萜酚RS溶液，至合适的容量瓶中，用无水乙醇稀释至Δ9-萜酚浓度为200μg/mL，Exo-萜酚浓度为10μg/mL；标准品母液溶液(a)：精密量取一定体积的USPΔ9-萜酚RS溶液，用无水乙醇定量稀释至0.2mg/mL；标准品溶液(b)：精密量取一定体积的标准品母液溶液(a)，用无水乙醇逐步稀释(如需要)至浓度约0.004mg/mL；灵敏度溶液(c)：精密量取一定体积的标准品溶液(b)，用无水乙醇稀释至浓度约0.2μg/mL。供试品溶液(d)：精密称量20mg萜酚，转移至100mL容量瓶中，用无水乙醇溶解定容至刻度，混匀。标准品溶液和供试品溶液尽量避免暴露于空气和光照下。所有样品在24h内检测完毕。

进样系统适用性溶液，计算信噪比(S/N)：

S/N＝(2H)/h

其中H为峰高，h为平均基线噪音的振幅；信噪比不低于10。

步骤：分别进样10μL的标准品溶液和供试品溶液，记录色谱图，并记录所有峰的峰面积。按加校正因子的主成分外标法以峰面积计算每种杂质相对于萜酚的百分占比：

100(1/F)(CV/W)(r_U/r_S)

其中，F为每种杂质的相对响应因子(见表1)；C为标准品溶液(b)中Δ9-萜酚的浓度(mg/mL)；V为供试品溶液(d)的体积(mL)；W为配制供试品溶液(d)的萜酚重量(mg)；r_U为供试品溶液(d)中每种杂质的峰面积；r_S为标准品溶液(b)中Δ9-萜酚的峰面积。各杂质限度如表1所示，总杂不超过5.0％。

表1各杂质限度