[发明专利]海鲜产品检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供一种海鲜产品检测试剂盒及其制备方法，属于微生物检测领域，包括抗副溶血性弧菌免疫磁珠、CdSe/ZnS‑羧基化聚苯乙烯免疫荧光微球。本发明提供的磁珠表面羧基修饰量较高，能够增加对抗体的偶联率，增加对副溶血性弧菌的捕获率；提供的CdSe/ZnS‑羧基化聚苯乙烯免疫荧光微球的制备方法能够减缓偶联速度，减少荧光微球的交联聚合，提高分散性，提高对抗体的偶联率，提高荧光强度值；利用本发明提供的海鲜产品检测试剂盒进行副溶血性弧菌的检测，具有较高的敏感度、准确度和可靠性。

技术领域

本发明属于微生物检测领域，具体涉及海鲜产品检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种重要的食源性病原菌，其引发的食源性疾病暴发是当前面临的重要的公共卫生问题之一。为了使副溶血性弧菌得到有效控制，建立高效灵敏的分离检测方法显得十分重要。当食品中副溶血性弧菌浓度较低时，采用常规检测方法易造成漏检，而对于比较灵敏的ELISA或PCR等快速检测方法，由于食品样品成分相对复杂，易出现假阳性。因此，亟待建立一种方法弥补以上不足。免疫磁珠分离技术(Immunomagnetic bead)是近年来发展起来的一项新的免疫学技术。该技术是将特异性抗体偶联在磁性颗粒表面，与样品中被检致病微生物发生特异性结合，在外加磁场的作用下，达到快速分离和富集目标细菌。利用该技术可有效地收集、浓缩大量样品中的少量病原微生物，并使之与样品中的干扰物质分离，从而降低假阳性。免疫磁珠技术已在医学和生物学的骨髓移植、干细胞、细胞器、癌细胞、病原菌的识别和分离等方面取得了显著成绩，在食品和环境样品中的病原微生物的分离和检测工作中，也显示出良好的开发应用前景。

现有技术如授权公告号为CN 107045061 B的中国发明专利，公开了一种基于磁性分离和量子点标记的副溶血性弧菌检测试剂盒，它包括：抗副溶血性弧菌免疫磁珠、量子点标记的抗副溶血性弧菌的纳米荧光生物探针；所述的抗副溶血性弧菌免疫磁珠是羧基化磁珠利用EDC和NHS活化后，再与兔抗副溶血性弧菌多克隆抗体IgG共价偶联；所述的纳米荧光生物探针是羧基化的荧光量子点活化后，与副溶血性弧菌鸡卵黄抗体IgY偶联；利用该发明制备的试剂盒进行副溶血性弧菌的检测具有特异性强、重复性好、灵敏度高的优点，可用于对食品中副溶血性弧菌的快速检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种功能化磁珠，该功能化磁珠表面羧基修饰量较高，能够提高对抗体的偶联率，且羧基具有较高的活性，与抗体上的氨基反应时无需活化。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

提供2-羟基戊酸和硫氰酸胍在提高免疫磁珠对目标菌捕获率中的用途。在硫氰酸胍引发下，2-羟基戊酸以较高的接枝率接枝在聚苯乙烯上，包覆磁性纳米粒，得到的磁珠表面羧基修饰量较高，能够增加对抗体的偶联率，增加对副溶血性弧菌的捕获率，提高检测的准确度和可靠性。且由于2-羟基戊酸的上与羧基基团相邻碳原子上存在的-OH具有一定的给电子能力，使得羧基对H的束缚能力较小，使得羧基具有较高的活性，与氨基反应时无需活化。

提供一种功能化磁珠，该功能化磁珠的制备方法包括以下步骤：

a、Fe₃O₄纳米粒子的制备；

b、油酸修饰的Fe₃O₄纳米粒子的制备；

c、吐温20修饰的Fe₃O₄聚集体的制备；

d、Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米复合粒子的制备；