[发明专利]海鲜产品检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1. 2-羟基戊酸和硫氰酸胍在提高免疫磁珠对副溶血性弧菌捕获率中的用途。

2.一种功能化磁珠，其特征在于：所述功能化磁珠的制备方法包括以下步骤：

a、Fe₃O₄纳米粒子的制备；

b、油酸修饰的Fe₃O₄纳米粒子的制备；

c、吐温20修饰的Fe₃O₄聚集体的制备；

d、Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米复合粒子的制备；

e、磁性纳米复合粒子的表面羧基功能化修饰：称取0.08-0.1g SDS十二烷基硫酸钠及0.008-0 .01g NaHCO₃于容器中，加入28-32mL制备的Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米复合粒子，超声分散后72-74℃水浴搅拌，并通入氮气进行保护，待液体温度达到72-74℃时，加入1.8-2.0mL苯乙烯、90-300μL 1.12-1.45g/mL的2-羟基戊酸、0.4-0.6mL 0.22-0.28g/mL硫氰酸胍、0.4-0.6mL 0.026-0.031g/mL的过硫酸钾反应7-8h，通过磁吸倾注法用乙醇洗涤沉淀，再用超纯水洗涤，后将沉淀溶解于超纯水中，得到羧基功能化磁珠。

3.根据权利要求2所述的一种功能化磁珠，其特征在于：所述功能化磁珠的表面羧基修饰量至少为307μmol/g。

4.权利要求2所述的一种功能化磁珠在制备海鲜产品检测试剂盒中的用途。

5.一种快速检测副溶血性弧菌的方法，具体包括：

S1、多克隆抗体的制备；

S2、权利要求2所述的功能化磁珠与抗体偶联；

S3、CdSe/ZnS-羧基化聚苯乙烯荧光微球与抗体偶联；

S4、免疫磁珠富集分离副溶血性弧菌；

S5、免疫荧光微球的标记；

S6、检测。

6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述步骤S3中CdSe/ZnS-羧基化聚苯乙烯荧光微球与抗体偶联的方法为：取14-16μL 0 .05mM CdSe/ZnS-羧基化聚苯乙烯荧光微球，加入9-12μL 1.8-2.3g/mL的麦芽糖醇，加入90-110μL 9.8-10.4mg/mL EDC、90-110μL 9.8-10.4mg/mL NHS和180-220μL PBST后利用垂直混合仪在室温下活化34-38min，12000rpm离心5-7min，弃上清，用PBST清洗1-2遍，重悬于450-550μL PBST中，加入110-150μg副溶血性弧菌鸡卵黄抗体IgY，利用漩涡混合仪在室温下偶联反应3-3.5h，12000rpm离心5-7min，弃上清，用PBST清洗1-2遍，加入1mL 1％BSA封闭量子点表面未与IgY共价偶联的羧基官能团，利用漩涡混合仪在室温下孵育1-1.5h，用PBS溶液清洗1-2遍，重悬于450-550μL的PBS溶液中。

7.一种海鲜产品检测试剂盒，包括抗副溶血性弧菌免疫磁珠、CdSe/ZnS-羧基化聚苯乙烯免疫荧光微球，所述的抗副溶血性弧菌免疫磁珠是利用权利要求2所述的功能化磁珠与兔抗副溶血性弧菌多克隆抗体IgG共价偶联；所述CdSe/ZnS-羧基化聚苯乙烯免疫荧光微球是利用权利要求6所述的方法制备所得。