[发明专利]一种适用于枯草芽孢杆菌的非天然氨基酸利用工具

权利要求书

1.一种基于非天然氨基酸调控的表达载体，其特征在于，含有编码tRNA的序列和特异性识别非天然氨基酸的氨酰tRNA合成酶基因；所述氨酰tRNA合成酶序列如SEQ ID NO.1所示；所述tRNA序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体含有一个或多个编码tRNA的序列。

3.一种基于非天然氨基酸调控的表达系统，其特征在于，含权利要求1或2所述的表达载体，及表达目的基因的载体或宿主细胞。

4.根据权利要求3所述的表达系统，其特征在于，所述宿主细胞在基因组上整合目的基因，并在目的基因ATG之后第三位密码子处插入终止密码子TAG。

5.根据权利要求3所述的表达系统，其特征在于，所述表达目的基因的载体是将目的基因连接在质粒上，并在目的基因ATG之后第三位密码子处插入终止密码子TAG。

6.含有权利要求1或2所述表达载体的细胞。

7.一种构建权利要求3或4所述表达载体的方法，其特征在于，将编码氨酰tRNA合成酶的基因与相应tRNA连接在载体pHT01上，并将目的基因与pP43NMK连接。

8.权利要求1或2所述的表达载体，或权利要求3～5任一所述的表达系统，或权利要求6所述的细胞在非天然氨基酸调控目的蛋白表达中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述应用是在发酵过程中，利用不同浓度的非天然氨基酸调控目的蛋白表达；所述非天然氨基酸包括但不限于：O-甲基-酪氨酸。

10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述不同浓度的非天然氨基酸是指浓度为0.001～3mmol/L的非天然氨基酸。