[发明专利]基于链霉亲和素化胶乳的MMP-3抗体复合物及其试剂盒

说明书

本发明涉及一种基于链霉亲和素化胶乳的MMP‑3抗体复合物及其试剂盒。具体地，本发明公开了一种MMP‑3单克隆抗体‑生物素‑链霉亲和素‑聚苯乙烯胶乳颗粒复合物，以及该复合物的制备方法和包含该复合物的检测试剂盒；所述试剂盒包含试剂R1和试剂R2；其中试剂R1含有缓冲液、电解质、增浊剂和防腐剂；试剂R2含有上述复合物、稳定剂、缓冲液、电解质、保护剂和防腐剂。本发明的试剂盒灵敏度高、稳定性好、精确度高，可用于各种生化分析仪器。

技术领域

本发明属于体外诊断医学检验试剂领域，具体地本发明涉及一种基于链霉亲和素化胶乳的MMP-3(基质金属蛋白酶3)抗体复合物及其检测试剂盒。

背景技术

基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases，MMPS)是一族需要Ca²⁺、Zn²⁺等金属离子作为辅助因子，具有降解细胞外基质为主功能的蛋白酶。其中基质金属蛋白酶的一个成员MMP-3(Matrix metalloproteinase-3，MMP-3)与其组织抑制剂-1(Tissueinhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1)共同维护细胞外基质稳态，达到动态平衡。有研究表明，检测MMP-3的水平与椎间盘突出和退变有关，并可作为检测强直性脊柱炎(AS)的有效指标。研究发现RA(类风湿关节炎)患者关节滑膜中MMP-3的含量明显增高，且关节滑膜中MMP-3蛋白和基因均处于过度表达状态，这提示MMP-3是降解软骨的指标之一，MMP-3是能提示RA患者中降解软骨的血清学指标。临床上MMP-3的正常人范围值在男：35.2～123.8ng/mL,女16.1～56.8ng/mL。

胶乳增强免疫浊度测定法(简称LETIA)是近年来免疫检测领域出现的一种新的免疫检测技术，适用在自动、半自动生化分析仪以及荧光层析平台上，其基本原理是通过在高分子胶乳微球表面交联的抗体，而当抗原与交联有抗体的微球结合后，能够在短时间内迅速聚集在一起，改变反应溶液的吸光度。而且，反应液吸光度的改变与被测抗原的浓度在一定范围内具有线性关系，可用来反映被测抗原的浓度，这种凝集反应可以放大信号，便于半定量、定量检测。因此，如何制备出适合的胶乳(免疫胶乳)是胶乳增强免疫浊度测定的关键。目前所用的多数胶乳采用高分子材料加入氨基、羧基等表面官能团修饰的方法，这种单一官能团的胶乳粒子在偶联抗体时往往存在交联定向性差、容易发生凝集、形成试剂后与抗原反应无法形成3D结构等问题。

发明内容

本发明针对现有技术上的不足，本发明的目的是提供一种稳定性强、非特异性结合降低、表面定向性好的胶乳颗粒。

本发明的目的还在于提供一种灵敏度高、稳定性好且精度高的采用胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3含量的试剂盒。

本发明第一方面提供了一种MMP-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物，所述复合物由链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒与生物素化MMP-3单克隆抗体通过生物素和链霉亲和素相连得到；其中，链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒与生物素化MMP-3单克隆抗体的质量比为1：3。

在另一优选例中，所述聚苯乙烯胶乳颗粒为羧化聚苯乙烯胶乳颗粒。

在另一优选例中，所述聚苯乙烯胶乳颗粒为直径为200±30nm的聚苯乙烯胶乳颗粒。较佳地，为直径为200nm的聚苯乙烯胶乳颗粒。

本发明第二方面本发明第一方面所述的的MMP-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物的制备方法，所述方法包括步骤：

(1)将聚苯乙烯胶乳颗粒溶于在MES缓冲液中，得到胶乳溶液；将EDAC溶于水中，得到EDAC溶液；将上述胶乳溶液、EDAC溶液和链霉亲和素混合后进行反应，反应结束后，收集固体；然后将得到的固体重悬于MES缓冲液中，得到含有链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒的MES缓冲液溶液；