[发明专利]一种苹果和苹果汁中展青霉素的快速检测方法

说明书

本发明涉及一种苹果和苹果汁中展青霉素的快速检测方法，包括以下步骤：步骤S1：称取5g样品到50mL离心管中，加入60:40；v/v的乙酸乙酯‑正己烷10mL，再加入7.5g无水Na₂SO4，旋紧盖子震荡后超声10min，涡旋10min，2000rpm离心；步骤S2：取步骤S1中2.5mL上层有机相至另一离心管中，40℃条件下用氮气缓缓吹至近干；步骤S3：加PH＝4的水至步骤S2的离心管中，定容至1.0mL，使得残留物完全溶解；步骤S4：取步骤S3中900μL的样液至进样瓶，加入100ng/mL内标溶液100μL，涡旋30s，滤膜过滤后，进行液相色谱串联质谱检测。本发明所有样品统一使用乙酸乙酯‑正己烷(60:40；v/v)超声提取，优化提取方法，相比单独乙酸乙酯振荡提取，提高了提取效率。

技术领域

本发明涉及检测相关技术领域，尤其涉及一种苹果和苹果汁中展青霉素的快速检测方法。

背景技术

展青霉素，又称棒曲霉素，是一种由曲霉和青霉等真菌产生的一种次级代谢产物。毒理学试验表明，展青霉素具有影响生育、致癌和免疫等毒理作用，同时也是一种神经毒素，具有致畸性，对人体的危害很大，导致呼吸和泌尿等系统的损害，使人神经麻痹、肺水肿、肾功能衰竭。展青霉素首先在霉烂苹果和苹果汁中发现，广泛存在于各种霉变水果中。展青霉素易溶于水、氯仿、丙酮、乙醇及乙酸乙酯等有机溶剂。当前检测方法主要有高效液相色谱法和高效液相色谱串联质谱法。

现有技术中GB5009.185-2016对于苹果，苹果汁使用不同的提取和净化方式，分别采用水和乙酸乙酯或乙腈提取，提取液经混合型阴离子交换柱或净化柱净化，净化液氮气吹干后用乙酸溶液复溶，使用紫外检测器或串联质谱检测器检测。现有技术中的方法中提供了两种不同的试样净化方式：混合型离子交换柱法和净化柱法。两种不同净化处理方式对应不同的提取过程，步骤繁琐，耗时较长，不易操作，详细步骤流程图如图1和图2所示。

现有技术中检测方法的缺点如下所述：

1、现有方法试样需经过提取、过夜、旋转蒸发、复溶、过净化柱、氮吹和复溶之后才能上仪器检测。前处理步骤繁琐、耗费时间较长，苹果试样需要2天1夜，果汁样品也需要3～4小时；

2、现有方法前处理成本较高：使用混合型阴离子交换柱或净化柱净化，增加了检测成本；

3、现有方法使用大量有机试剂，不够环保。

有鉴于上述的缺陷，本设计人积极加以研究创新，以期创设一种苹果和苹果汁中展青霉素的快速检测方法，使其更具有产业上的利用价值。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种苹果和苹果汁中展青霉素的快速检测方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种苹果和苹果汁中展青霉素的快速检测方法，包括以下步骤：

步骤S1：称取5g样品到50mL离心管中，加入60:40；v/v的乙酸乙酯-正己烷10mL，再加入7.5g无水Na₂SO4，旋紧盖子震荡后超声10min，涡旋10min，2000rpm离心；

步骤S2：取步骤S1中2.5mL上层有机相至另一离心管中，40℃条件下用氮气缓缓吹至近干；

步骤S3：加PH＝4的水至步骤S2的离心管中，定容至1.0mL，使得残留物完全溶解；

步骤S4：取步骤S3中900μL的样液至进样瓶，加入100ng/mL内标溶液100μL，涡旋30s，滤膜过滤后，进行液相色谱串联质谱检测；

其中，

液相色谱系统：Agilent 1200；

质谱/质谱系统：AppliedBiosystemsAPI 4500串联质谱仪；