[发明专利]一种药物和基因双重运载系统、其制备方法及应用

说明书

本发明提供一种药物和基因双重运载系统，包括载体与生物素化的siRNA，所述载体与生物素化的siRNA之间通过亲和素接枝连接；所述载体为核壳结构，内核为聚三亚甲基碳酸酯，外壳为氧化葡聚糖，所述聚三亚甲基碳酸酯内核内负载有疏水性药物；所述氧化葡聚糖和聚三亚甲基碳酸酯的质量比为(1～6)∶1。本发明使用PTMC制备核壳状的纳米载体，并与亲和素‑生物素反应体系结合，克服目前SiRNA阳离子脂质体毒性大、无法同时运载其他药物的缺陷，为肿瘤等多基因、多因素疾病的诊疗提供新的思路。本发明还提供了一种药物和基因双重运载系统的制备方法及其应用。

技术领域

本发明属于生物医学工程技术领域，尤其涉及一种药物和基因双重运载系统、其制备方法及应用。

背景技术

肿瘤的发生是多因素、多阶段、多基因相互作用的复杂过程。治疗手段主要有手术治疗、放射治疗、化学治疗和生物治疗。然而，这些治疗手段往往会损伤人体正常细胞，产生严重的毒副反应。综合治疗的肿瘤仍可增殖复发，因此彻底治疗肿瘤是目前的难点。

因肿瘤的发生与癌基因的突变相关，近年来，基因治疗逐渐成为药学、医学和生物化学领域中的研究重点。“基因治疗”是将基因物质引入病人的细胞或组织从而达到治疗疾病的目的。据统计，全球进行的疾病基因治疗临床试验中，有64％是肿瘤基因治疗临床试验。基因疗法可以为那些不能手术切除的、转移肿瘤或难治性实体瘤提供一种替代疗法。肿瘤的基因治疗研究中广泛应用到的核酸有质粒DNA、合成的核酸如反义寡核苷酸、小干扰RNA(siRNA)和其他双链RNA等。各种类型的核酸在分子基因水平可以起到不同的效应，质粒DNA主要用于细胞核内的输送，用以取代或替代靶向细胞某种特异的基因功能，发挥的是“获得基因功能”的作用；相反，细胞质输送的反义寡核苷酸或siRNA以序列特异性的方式通过抑制内源性基因的表达发挥治疗作用，是一种“失去基因功能”的作用，siRNA是一类长约21～23个核苷酸的特殊双链RNA分子，其序列与所作用的靶mRNA序列具有同源性，在mRNA水平上诱发序列特异性的转录后基因表达沉默，能够有效抑制转录后基因表达，因其特异性、高效性以及作为基因治疗药物的巨大潜力而备受青睐。

因此，siRNA成为目前治疗的可选择方案。但单种药物并不能满足治疗的需要，因此多重药物载体的设计成为目前的热门课题。目前科研上，基因载体以病毒和脂质体为主。病毒的转染效率高，但存在致癌性和安全性问题。脂质体为阳离子载体，具有一定的毒性，且无法携带其他的药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种药物和基因双重运载系统、其制备方法及应用，本发明中的药物和基因双重运载系统能够同时运载药物和任意序列的siRNA，并且稳定性好、无毒性。

本发明提供一种药物和基因双重运载系统，包括载体与生物素化的siRNA，所述载体与生物素化的siRNA之间通过亲和素接枝连接；

所述载体为核壳结构，内核为聚三亚甲基碳酸酯，外壳为氧化葡聚糖，所述聚三亚甲基碳酸酯内核内负载有疏水性药物；

所述氧化葡聚糖和聚三亚甲基碳酸酯的质量比为(1～6)∶1。

优选的，所述载体的粒径为50～400nm。

优选的，所述载体和亲和素的质量比为(0.1～5)∶1。

本发明提供一种药物和基因双重运载系统的制备方法，包括以下步骤：

A)将葡聚糖与高碘酸钠混合，进行氧化反应，然后加入多元醇终止反应，透析得到氧化葡聚糖；

B)将氧化葡聚糖水溶液、聚三亚甲基碳酸酯溶液和疏水性药物在共溶剂中混合，超声破碎形成初乳，然后加入2～8g/L的聚乙烯醇水溶液，超声破碎形成复乳，最后再加入0.1～1g/L的聚乙烯醇水溶液，经离心、洗涤和重悬后，得到载体；

所述氧化葡聚糖和聚三亚甲基碳酸酯的质量比为(1～6)∶1；