[发明专利]内源启动子驱动的尖孢镰刀菌分泌表达载体、Foc4转化菌及构建方法有效
| 申请号： | 202010111618.0 | 申请日： | 2020-02-24 |
| 公开（公告）号： | CN111206045B | 公开（公告）日： | 2021-08-20 |
| 发明（设计）人： | 常丽丽;仝征;彭存智;王丹;徐兵强 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N1/15;C12R1/77 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 潘颖 |
| 地址： | 571101 *** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 内源 启动子 驱动 镰刀 分泌 表达 载体 foc4 转化 构建 方法 | ||
1.一种内源启动子驱动的尖孢镰刀菌分泌表达载体，其特征在于，以pCT74HSPG载体为基础载体，采用SEQ ID NO：1所示的Six1d基因启动子替换pCT74HSPG载体中的ToxA启动子；
所述pCT74HSPG载体为：在pCT74载体的4665 bp处插入Six1d分泌蛋白N端23aa的胞外信号肽的真菌分泌型表达载体74HSP。
2.根据权利要求1所述的尖孢镰刀菌分泌表达载体，其特征在于，所述胞外信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
3.根据权利要求1所述的尖孢镰刀菌分泌表达载体，其特征在于，所述胞外信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的尖孢镰刀菌分泌表达载体，其特征在于，所述Six1d基因启动子来源于尖孢镰刀菌1号生理小种的基因组。
5.权利要求1至4中任一项所述尖孢镰刀菌分泌表达载体的构建方法，其特征在于，以pCT74HSPG载体为基础载体，采用SEQ ID NO：1所示的Six1d基因启动子替换pCT74HSPG载体中的ToxA启动子；
所述pCT74HSPG载体为：在pCT74载体的4665 bp处插入Six1d分泌蛋白N端23aa的胞外信号肽的真菌分泌型表达载体74HSP。
6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法具体为：利用限制性内切酶将pCT74HSPG的ToxA启动子区和分泌信号肽序列酶切下来，补平粘性末端后，将Six1d基因启动子和分泌信号肽序列通过平末端连接进分泌载体pCT74HSPG中。
7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述限制性内切酶为
8.一种Foc4转化菌，其特征在于，其构建方法为：将权利要求1至4中任一项所述的尖孢镰刀菌分泌表达载体转化入尖孢镰刀菌Foc4。
9.权利要求8所述Foc4转化菌的构建方法，其特征在于，将权利要求1至4中任一项所述的尖孢镰刀菌分泌表达载体转化入尖孢镰刀菌Foc4。
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