[发明专利]线粒体自噬抑制剂在制备提高肝癌细胞对索拉非尼的敏感性的药物中的应用

说明书

本发明公开了线粒体自噬抑制剂在制备提高肝癌细胞对索拉非尼敏感性药物中的应用，属于生物医药技术领域。该方法通过药物或者基因水平抑制线粒体自噬恢复细胞对索拉非尼的敏感性。本发明可以显著增强乏氧诱导索拉非尼耐药肝癌细胞对索拉非尼的敏感性，增强索拉非尼的治疗效果，为克服肝癌靶向耐药提供了新思路。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，特别涉及线粒体自噬抑制剂在制备提 高肝癌细胞对索拉非尼的敏感性的药物中的应用。

背景技术

原发性肝细胞肝癌(HCC)是全球范围内发病率及死亡率最高的恶性 肿瘤之一，2018年全球新发HCC病例达60万，其中有近一半发生在中国， 是关乎我国人群健康的重大社会医学问题。尽管HCC诊断和治疗策略不断 进步，肝癌患者的预后仍未得到明显改善。

索拉非尼(Sorafenib，Sora)是晚期HCC一线治疗的多激酶靶向药， 亚洲肝癌患者在接受索拉非尼治疗后中位生存期由对照组的4.2个月延长 到6.5个月，索拉非尼耐药已成为严重限制患者生存获益的“瓶颈”。即今 为止，研究者在克服肝癌靶向耐药方面做了大量工作，但仍未解决索拉非 尼耐药这一关键科学问题。

线粒体自噬(Mitophagy)是指细胞在活性氧刺激、营养缺乏等情况下， 通过自噬机制选择性清除多余或损伤线粒体的过程，对于线粒体质量控制 以及细胞生存稳态至关重要。乏氧是实体肿瘤治疗抵抗的重要原因，也是 诱导线粒体自噬的关键因素；然而乏氧诱导线粒体自噬在肿瘤靶向耐药中 的作用及调控机制尚不清楚。

发明内容

本发明提供了线粒体自噬抑制剂在制备提高肝癌细胞对索拉非尼的敏 感性的药物中的应用，能够解决上述现有技术问题中的一种或几种。

本发明公开了线粒体自噬抑制剂在制备提高肝癌细胞对索拉非尼的敏 感性的药物中的应用，通过投射电镜、流式线粒体含量Mito-tracker染色、 定量RT-PCR、Western-blot等方法，探究抑制线粒体自噬的活性后，肝癌 细胞对索拉非尼的敏感性，以及其作用的分子机制。通过本研究对肝癌临 床治疗的耐药性提供新思路。

在此基础上，本发明进一步公开了线粒体自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤 (3-Methyladenine，3MA)以及Pink1(PTEN Induced Kinase 1，磷酸酯酶与 张力蛋白同源物诱导激酶1)表达抑制剂等在制备提高肝癌细胞对索拉非尼 的敏感性的药物中的应用。

本发明进一步公开了miRNA-210-5P拮抗剂或者miRNA-210-5P抑制剂 在制备提高肝癌细胞对索拉非尼的敏感性的药物中的应用。

通过乏氧诱导及索拉非尼长时间处理，构建乏氧诱导的索拉菲尼耐药 肝癌细胞Huh7(Huh7-H-SR)和乏氧诱导的索拉菲尼耐药肝癌细胞LM3 (LM3-H-SR)。具体的，将肝癌细胞株Huh7、LM3置于用含有1％O₂的密 封缺氧室内培养，并在培养过程中持续加入IC50量的索拉非尼，构建乏氧 诱导的索拉菲尼耐药肝癌细胞。通过投射电镜、流式线粒体含量Mito-tracker 染色、Western-blot等方法检测，可以发现Huh7-H-SR和LM3-H-SR细胞 线粒体自噬处于超激活状态。

在一些实施方式中，使用线粒体自噬抑制剂，如3MA、氯喹等药物， 直接抑制线粒体的超激活状态，降低自吞噬，从而增强肝癌细胞对索拉非 尼的敏感性。

在一些实施方式中，使用Pink1表达抑制剂，通过基因水平敲低Pink1 抑制线粒体自噬。Pink1-Parkin是经典的介导线粒体自噬途径，基因水平敲 低Pink1可以有效抑制线粒体自噬，从而增强肝癌细胞对索拉非尼的敏感 性。