[发明专利]一种活体脂肪量沉积的无损检测方法

权利要求书

1.一种活体脂肪量沉积的无损检测方法，其特征在于，所述无损检测方法通过活体动物的粪便中的菌群的丰富度来预测活体脂肪量的沉积，所述的无损检测方法包括如下步骤：

1).收集活体动物的粪便，去除活体动物的粪便中的杂质，将活体动物的粪便制备成悬浮液A并保存备用；

2).将制备的悬浮液A超声处理后得到悬浮液B；

3).采用第一试剂盒的方法提取经过超声处理的悬浮液B中的DNA；

4).采用体外DNA扩增技术，将515f/806r引物扩增16S rDNA的V4区，用第二试剂盒纯化回收PCR产物，并检测PCR产物的序列；

5).将测得的序列使用数据处理系统获得Chao1指数以及ACE指数；

6).利用获得的Chao1指数以及ACE指数计算菌群的丰富度；

7).对得到的Chao1指数以及ACE指数分别与腹脂量、腹脂率进行线性回归分析，构建线性模型得到二元一次方程：

Y＝-0.0491X+165.94，Y为腹脂重，X为Chao1指数；

Y＝-0.0039X+13.96，Y为腹脂率，X为Chao1指数；

Y＝-0.0498X+164.75，Y为腹脂重，X为ACE指数；

Y＝-0.004X+13.92，Y为腹脂率，X为ACE指数。

2.根据权利要求1所述的活体脂肪量沉积的无损检测方法，其特征在于，所述悬浮液A的制备方法为：将体积比为1-3:2-5:1-3的生理盐水，蛋白酶以及溶菌酶混合，并添加至活体动物的粪便中，搅拌形成悬浮液A，且所述生理盐水的浓度为15-20mmol/L，所述蛋白酶的浓度为15-30mg/mL，所述溶菌酶的浓度为20-50mg/mL。

3.根据权利要求1所述的活体脂肪量沉积的无损检测方法，其特征在于，所述悬浮液B的制备方法为：在温度为30-45℃，超声频率为15-45Hz的条件下进行超声处理10-20min，进行反复过滤，收集滤液并对滤液进行3-6次的离心操作，往离心得到沉淀物中加入适量的浓度为10-15mmol/L的生理盐水，得到悬浮液B。

4.根据权利要求1所述的活体脂肪量沉积的无损检测方法，其特征在于，所述第一试剂盒包括DNA吸附柱以及工作液，且所述采用第一试剂盒的方法为：将经过超声处理的悬浮液B加入所述DNA吸附柱中，10000-15000r/min的转速下离心1-3min，弃废液，加入所述工作液，在10000-15000r/min的转速下离心1-3min，弃废液，将DNA吸附柱进行洗脱后，得到活体动物的粪便中菌群基因组的DNA。

5.根据权利要求1所述的活体脂肪量沉积的无损检测方法，其特征在于，所述第二试剂盒包括DNA吸附柱以及工作液，且所述第二试剂盒的使用方法与第一试剂盒的使用方法相同。

6.根据权利要求4所述的活体脂肪量沉积的无损检测方法，其特征在于，且所述工作液包括质量浓度为5-10％的十二烷基硫酸钠，质量浓度为1-5％的异戊醇，质量浓度为45-65％的乙醇。

7.根据权利要求4所述的活体脂肪量沉积的无损检测方法，其特征在于，所述DNA吸附柱进行洗脱的方法为：往DNA吸附柱中加入体积比为1-5:1-3的生理盐水以及三羟甲基氨基甲烷，且所述生理盐水的质量浓度为1-3％，所述三羟甲基氨基甲烷的质量浓度为2-5％。