[发明专利]一种花叶矮蒲苇组织培养的培养方法

说明书

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种花叶矮蒲苇组织培养的培养方法。本发明花叶矮蒲苇组织培养的培养方法包括以下步骤：外植体的选择、外植体的消毒灭菌、芽诱导培养、继代培养、生根培养和移栽炼苗。本方法结合了花叶矮蒲苇的生长特点，通过选择合适的消毒方式、培养基和炼苗方式，采用高、低浓度激素交替增殖，减少玻璃化的同时能有效提高增殖系数，在增殖培养时能够解决高浓度激素导致的玻璃化严重的问题，炼苗方式简单、新颖、高效，能大大降低生产成本，能在一定时间内高效经济地获取大量优良花叶矮蒲苇组培苗，具有广泛的市场应用前景。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体公开了一种花叶矮蒲苇组织培养的培养方法。

技术背景

花叶矮蒲苇是多年生草本植物，株高120cm，叶聚生于基部，长而狭，边有细齿，圆锥花序大，羽毛状，银白色，国外著名的观赏草，用于园林绿化或岸边栽植。阳性，喜阳光充足、温暖湿润环境，亦耐寒；适应性强，不择土壤，既耐水湿，亦耐干旱，现在市场上需求量很大，目前国内关于花叶矮蒲苇组织培养研究的报道很多，但是存在增殖比例不稳定，遗传不稳定，扩繁转接时叶子长操作难，炼苗清洗难、栽植难以及生产成本高等缺点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供了一种花叶矮蒲苇组织培养的培养方法。本发明采用高、低浓度激素交替增殖，高增殖比例扩繁，能够提高繁殖速度和苗的整齐度，并提高性状稳定性，从而建立更适合花叶矮蒲苇快速繁殖的工厂化生产体系。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种花叶矮蒲苇组织培养的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）外植体的选择和消毒灭菌：选取生长健壮且无病虫的花叶矮蒲苇植株，选取新长出的嫩芽为外植体，去除外植体多余茎段和包裹的叶片，并洗去附着的碎叶和杂质，将处理完的外植体放入混有1~2滴吐温的质量分数为0.08%~0.12%的升汞溶液中，消毒7~9分钟，取出用无菌水冲洗4~6次，切除褐变部分，将外植体切割成2~3cm小段，接种到初代培养基上培养5~7天，所述初代培养基为含有蔗糖和琼脂粉的1/2MS培养基；

（2）芽诱导培养：从初代培养基中选取无污染外植体，将其接种到诱导培养基上，7~15天形成不定芽，再培养15~25天后不定芽增高到2~3cm，所述诱导培养基为含有0.5~1.5mg/L的6-BA、0.4~0.6mg/L的2, 4-D、蔗糖和琼脂的MS培养基；

（3）增殖培养：将步骤（2）中经芽诱导培养后的不定芽接种到增殖培养基上，所述增殖培养基为含有高浓度激素6-BA或低浓度激素6-BA、蔗糖和琼脂的MS培养基；

（4）生根培养：将增殖培养后的苗分成单株接入生根培养基中继续培养，所述培养基为含有0~1.0 mg/L的IBA、蔗糖和琼脂的1/4MS培养基；

（5）炼苗：将在生根培养基上培养25~30天的苗取出，去除根部，洗去培养基，置于多菌灵溶液浸泡2~3分钟，洗净栽种在泥炭和珍珠岩的混合基质中，栽种完成放入大棚内，保持温度在15~25℃，湿度在65%以上。

所述步骤（3）中，整个增殖培养过程中高浓度激素6-BA2.0~3.0mg/L、低浓度激素6-BA0.2~0.4mg/L交替使用，扩繁增殖系数控制在8以上。

所述步骤（4）中，生根培养时7~15天苗长出根原基，15~25天根长3~4cm，生根率95%~100%。

所述步骤（2）-（4）中，所述腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基中蔗糖20~30g/L、琼脂粉5~7g/L，培养基的pH为5.8~6.2。

所述步骤（2）-（4）中，芽诱导、增殖、生根培养过程中，培养环境温度24~26℃，光照1500~2500lx。

所述步骤（5）中炼苗时混合基质泥炭和珍珠岩的比例为3:0.5~2。