[发明专利]一种快速提取血浆、尿液游离DNA的试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种快速提取血浆、尿液游离DNA的试剂盒和方法。核酸释放与结合剂，包括2.5M～3.5M GuSCN、30％～35％V/V的异丙醇、3％～5％V/V的Triton X100、45mM～55mM EDTA、15mM～25mM Tri‑HCl、质量分数0.3％～0.6％DTT，溶剂为水。本发明提供了一种从血浆、尿液分离游离DNA的方法，该方法操作过程简便快捷，250ul样本即可获得足够的DNA且分离的DNA含量和纯度高，重复性高，半小时内即可完成大批量样本的处理。

技术领域：

本发明属于DNA提取领域，具体涉及一种快速提取血浆、尿液游离DNA的方法。

背景技术：

核酸提取是下游核酸检测、研究或产品开发的起点，所分离的核酸的质量和完整性直接影响研究或诊断结果，因此核酸抽提是分子生物学最关键的方法之一。理想的提取方法可以获取高质量的靶核酸，同时没有蛋白、糖脂和其它核酸污染，目前已有很多专业化的核酸抽提方法可以从各种生物样品中抽提DNA或者总核酸。

目前核酸分离技术虽然发展迅速，但是均存在一些缺点，例如：酚氯仿抽提法虽然核酸纯度高，但是其主要成分对人体有害，且容易造成环境污染，同时提取过程需要反复抽提，多次换管，步骤繁琐，会造成样本的丢失与污染；碱裂解法：该法提取的核酸不容易保存；磁珠法因提取成本较高，从而限制了广泛应用。试剂盒法提取的核酸DNA浓度纯度低操作复杂。

另外由于临床血液样本量大，采集后通常无法及时进行DNA的提取，血浆中含有大量的核酸酶会对游离DNA造成严重降解，因此储存时间对游离DNA提取效率的影响很大。还有，现有的试剂盒法采用的释放剂与结合液都是不同的液体，在使用时增加了配制的工作量，也不利于精简操作流程。

因此，临床上急需一种既可以保存游离DNA又能简便快速高效提取游离DNA的试剂盒与方法，所提DNA纯度高、得率高，以保证即使在样本量有限的情况下下游试验的正常进行。

发明内容：

本发明的目的是提供一种既可以保存游离DNA又能简便快速高效提取游离DNA的试剂盒与方法，所提DNA纯度高、得率高，以保证即使在样本量有限的情况下，下游试验的正常进行。

本发明的既可以保存游离DNA又能简便快速高效提取游离DNA的核酸释放与结合剂，包括2.5M～3.5M GuSCN、30％～35％V/V的异丙醇、3％～5％V/V的Triton X100、45mM～55mM EDTA、15mM～25mM Tri-HCl、质量分数0.3％～0.6％DTT，溶剂为水。

优选，所述的核酸释放与结合剂包括3M GuSCN、33％V/V异丙醇、4％V/V TritonX100、50mM EDTA、20mM Tri-HCl、质量分数0.5％DTT，溶剂为水。

本发明的第二个目的是提供一种快速提取血浆、尿液游离DNA的试剂盒，其包括上述核酸释放与结合剂、洗涤液1和洗涤液2；

所述的洗涤液1包括：1.5M GuSCN、16.5％V/V的异丙醇、2％V/V Triton X100、25mM EDTA、10mM Tri-HCl，溶剂为水；

所述的洗涤液2包括：25％V/V乙醇、25％V/V的异丙醇、100mM氯化钠、10mM Tri-HCl，溶剂为水。

本发明的第三个目的是提供一种快速提取血浆、尿液游离DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将血浆、尿液或无细胞液体样品转移至离心管中，然后加入上述核酸释放与结合剂，涡旋混匀，再转移至纯化柱中，离心去除滤液，将纯化柱装回收集管中，再经洗涤和洗脱获得DNA。