[发明专利]一种快速提取血浆、尿液游离DNA的试剂盒和方法

权利要求书

1.一种核酸释放与结合剂，其特征在于，包括2.5M～3.5M GuSCN、30％～35％V/V的异丙醇、3％～5％V/V的Triton X100、45mM～55mM EDTA、15mM～25mM Tri-HCl、质量分数0.3％～0.6％DTT，溶剂为水。

2.根据权利要求1所述的核酸释放与结合剂，其特征在于，所述的核酸释放与结合剂包括3M GuSCN、33％V/V异丙醇、4％V/V Triton X100、50mM EDTA、20mM Tri-HCl、质量分数0.5％DTT，溶剂为水。

3.一种快速提取血浆、尿液游离DNA的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的核酸释放与结合剂、洗涤液1和洗涤液2；

所述的洗涤液1包括：1.5M GuSCN、16.5％V/V的异丙醇、2％V/V Triton X100、25mMEDTA、10mM Tri-HCl，溶剂为水；

所述的洗涤液2包括：25％V/V乙醇、25％V/V的异丙醇、100mM氯化钠、10mM Tri-HCl，溶剂为水。

4.一种快速提取血浆、尿液游离DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将血浆、尿液或无细胞液体样品转移至离心管中，然后加入权利要求1或2所述的核酸释放与结合剂，涡旋混匀，再转移至纯化柱中，离心去除滤液，将纯化柱装回收集管中，再经洗涤和洗脱获得DNA。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的再经洗涤和洗脱获得DNA具体步骤为：加入洗涤液1至纯化柱中，离心去除滤液，将纯化柱装回收集管中，加入洗涤液2至纯化柱中，离心去除滤液，将纯化柱装回收集管中，再次加入洗涤液2至纯化柱中，离心去除滤液，将纯化柱装回收集管中，离心，取出纯化柱进行干燥，然后用无核酸酶水洗脱获得DNA；

所述的洗涤液1包括：1.5M GuSCN、16.5％V/V的异丙醇、2％V/V Triton X100、25mMEDTA、10mM Tri-HCl，溶剂为水；

所述的洗涤液2包括：25％V/V乙醇、25％V/V的异丙醇、100mM氯化钠、10mM Tri-HCl，溶剂为水。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，具体步骤如下：

步骤一.核酸释放与结合

(1)转移250uL血浆、尿液或无细胞液体样品至无DNase RNase的1.5mL离心管中；

(2)加入500uL核酸释放与结合剂至样品中，涡旋混匀20秒；

(3)转移步骤(2)的750uL混合液至纯化柱中，8,000×g离心60秒；

(4)倒弃滤液，把纯化柱装回收集管中；

步骤二.核酸纯化

(1)加入500uL洗涤液1至纯化柱中，8,000×g离心60秒；

(2)倒弃滤液，把纯化柱装回收集管中，加入500uL洗涤液2至纯化柱中，8,000×g离心60秒；

(3)倒弃滤液，把纯化柱装回收集管中，加入500uL洗涤液2至纯化柱中，8,000×g离心60秒；

(4)倒弃滤液，把纯化柱装回收集管中，13,000×g离心3分钟；

(5)取出纯化柱，装在无DNase RNase的1.5mL离心管中，然后放置于56℃烘箱中干燥10分钟；

步骤三.洗脱核酸

(1)将纯化柱转移至新的无DNase RNase的1.5mL离心管中，加入10-20ul NucleaseFree Water至纯化柱的膜中央，放置3分钟，13,000×g离心1分钟，收集滤液；

(2)丢弃DNA纯化柱，把DNA保存。