[发明专利]一种用于检测生物细胞粘度的近红外荧光分子探针及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及荧光探针检测技术领域，特别涉及一种用于检测生物细胞粘度的近红外荧光分子探针及其制备方法和应用。以9‑(2‑羧苯基)‑6(二乙氨基)‑4(4‑甲硫基苯亚甲基)‑1,2,3,4‑四氢蒽为荧光基团，以活化的双键为反应活性基团，该分子探针优选为9‑(2‑羧苯基)‑6(二乙氨基)‑4‑[4‑(甲基哌嗪)‑1苯亚甲基]‑1,2,3,4‑四氢蒽。本发明制备得到的分子探针可应用于生物样本检测，通过扭转分子内电荷转移机制，分子探针在生物样本成像中背景荧光小，发射波长长，近红外发光，感光度极好，由于背景荧光的减少和对生物样品的光损伤小以及穿透深度的增加，使分子探针适合生物细胞内成像。

技术领域

本发明涉及荧光探针检测技术领域，特别涉及一种用于检测生物细胞粘度的近红外荧光 分子探针及其制备方法和应用。

背景技术

细胞内液体的稳定性是活细胞正常活动的基础，其异常变化与许多细胞技能失常有关， 细胞内液体粘度特别是在调控扩散介导的细胞过程中起着至关重要的过程，包括信号和运输。 然而传统的粘度计虽然适用于宏观液体介质，但不能用于检测活细胞的粘度。小分子荧光探 针以其高灵敏度，实时检测，快速无损分析等优点，在荧光成像领域得到了广泛的应用，因 此小分子荧光探针可以非常理想的可视化和监测活细胞内的粘度的动态变化。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明所要解决的技术问题是，提供一种用于检测生物细胞 粘度的近红外荧光分子探针及其制备方法和应用，制备得到的分子探针可应用于生物细胞样 本检测，通过扭转分子内电荷转移机制，分子探针在生物样本成像中背景荧光小，发射波长 长，近红外发光，感光度极好，由于背景荧光的减少和对生物样品的光损伤小以及穿透深度 的增加，使分子探针适合生物细胞内成像。

本发明为实现上述目的采用的技术方案是：一种用于检测生物细胞粘度的近红外荧光分 子探针，以9-(2-羧苯基)-6(二乙氨基)-4(4-甲硫基苯亚甲基)-1,2,3,4-四氢蒽为荧光基团，以活 化的双键为反应活性基团，该分子探针优选为9-(2-羧苯基)-6(二乙氨基)-4-[4-(甲基哌嗪)-1苯 亚甲基]-1,2,3,4-四氢蒽，其化学结构式是：

本发明还包括一种制备上述用于检测生物细胞粘度的近红外荧光分子探针的方法，包括 以下步骤：

(1)将浓硫酸加入到烧瓶中，再加入环己酮和2-[(4-二乙胺基)-2羟基苯甲酰]苯甲酸， 70-90℃进行反应，反应结束，待溶液冷却到室温，放入冰水浴中，搅拌均匀，然后向混合液 体中滴加高氯酸，析出固体，得到中间产物9-(2-羧苯基)-6(二乙氨基)-1,2,3,4-四氢蒽，命名为F₃₇₆；

(2)将步骤(1)得到的中间产物F₃₇₆，用无水乙醇溶解，加入4-(4-甲基哌嗪基)苯甲醛， 于70-90℃下搅拌回流后，冷却至室温后，将滤液旋干，通过层析柱方法得到目标产物9-(2- 羧苯基)-6(二乙氨基)-4-[4-(甲基哌嗪)-1苯亚甲基]-1,2,3,4-四氢蒽，命名为F₅₆₂。

进一步的，所述步骤(1)中，

2-[(4-二乙胺基)-2羟基苯甲酰]苯甲酸与环己酮的摩尔比优选为1:2，

反应时间优选为2h，

加样顺序优选为，先加浓硫酸，冰水浴中搅拌5分钟，然后加入环己酮，0℃搅拌5分钟， 最后加环己酮和2-[(4-二乙胺基)-2羟基苯甲酰)]苯甲酸。

进一步的，所述步骤(2)中，

中间产物F₃₇₆与4-(4-甲基哌嗪基)苯甲醛的摩尔比优选为1:2，

回流反应时间优选为30min。