[发明专利]一种用于检测生物细胞粘度的近红外荧光分子探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于检测生物细胞粘度的近红外荧光分子探针，其特征在于：以活化的双键为反应活性基团，其化学结构式是：

2.一种用于检测生物细胞粘度的近红外荧光分子探针的制备方法，荧光分子探针具有如权利要求1所述的化学结构式，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将浓硫酸加入到烧瓶中，再加入环己酮和2-[(4-二乙胺基)-2羟基苯甲酰]苯甲酸，70-90℃进行反应，反应结束，待溶液冷却到室温，放入冰水浴中，搅拌均匀，然后向混合液体中滴加高氯酸，析出固体，得到中间产物F₃₇₆，结构式为：

(2)将步骤(1)得到的中间产物F₃₇₆，用无水乙醇溶解，加入4-(4-甲基哌嗪基)苯甲醛，于70-90℃下搅拌回流后，冷却至室温后，将滤液旋干，通过层析柱方法得到目标产物。

3.根据权利要求2所述的用于检测生物细胞粘度的近红外荧光分子探针的制备方法，其特征是：

所述步骤(1)中，

2-[(4-二乙胺基)-2羟基苯甲酰]苯甲酸与环己酮的摩尔比为1:2，

反应时间为2h，

加样顺序为，先加浓硫酸，冰水浴中搅拌5分钟，然后加入环己酮，0℃搅拌5分钟，最后加环己酮和2-[(4-二乙胺基)-2羟基苯甲酰]苯甲酸。

4.根据权利要求2所述的用于检测生物细胞粘度的近红外荧光分子探针的制备方法，其特征是：

所述步骤(2)中，

中间产物F₃₇₆与4-(4-甲基哌嗪基)苯甲醛的摩尔比为1:2，

回流反应时间为30min。

5.一种用于检测生物细胞粘度的近红外荧光分子探针的应用，其特征在于：荧光分子探针具有如权利要求1所述的化学结构式，或通过权利要求2-4任一项所述的制备方法制备，应用于检测生物细胞内粘度以及应用于检测活细胞粘度变化及荧光成像。

6.根据权利要求5所述的用于检测生物细胞粘度的近红外荧光分子探针的应用，其特征是：建立分子探针对粘度的滴定线性曲线步骤包括，

(1)配制pH＝7.40，浓度为20mM的PBS缓冲盐溶液；浓度为1mM的分子探针的DMSO溶液；

(2)分别取甲醇与丙三醇比例为：10:0，8:2，7:3，6:4，5:5，4:6，3:7，2:8，1:9和0:10的溶液共10份，在试管内混和均匀，然后再分别加入10μL浓度为1mM的分子探针的DMSO溶液，混合均匀，在荧光比色皿中完成测样；

(3)通过荧光分光光度计测试荧光强度，得到荧光强度比值，检测细胞粘度的荧光强度的激发波长为605nm；

(4)分别以丙三醇的含量为横坐标，以荧光强度比值为纵坐标，得到关于粘度、荧光强度比值的线性方程。

7.根据权利要求5所述的用于检测生物细胞粘度的近红外荧光分子探针的应用，其特征是：检测分子探针在最小粘度和最大粘度的紫外吸收步骤包括，

分别取甲醇与丙三醇比例为：10:0和0:10的溶液各2份，在试管内混均匀，然后再分别加入10μL浓度为1mM的分子探针的DMSO溶液，混合均匀，在比色皿中完成测样，得到两份样品的紫外吸收图谱。