[发明专利]一种HA阻断剂的制备方法、抗体检测系统

说明书

本发明属于生物医学技术领域，公开了一种HA阻断剂的制备方法、抗体检测系统，利用浓度为33％‑50％的硫酸铵纯化抗体；在得到的纯化抗体中加入戊二醛交联；透析完成后回收抗体并保存；将样品、检测微球、异嗜性抗体干扰指示微球和标记可检测信号的第二抗体混合，形成一反应体系；检测反应体系中第二抗体‑抗原‑第一抗体‑微球四元复合物中微球上的可检测信号，并与标准值或标准曲线比较，确定反应体系中目标抗原的存在与否和/或数量。本发明制备的HA阻断剂抗干扰能力强，完全消除HA干扰，不会对免疫检验产生干扰，有效减少假阳性发生率，提高免疫检验的准确度及精准率；本发明的制备方法简单，容易控制，成本低。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，尤其涉及一种HA阻断剂的制备方法、抗体检测系统。

背景技术

目前，最接近的现有技术：阻断剂，也叫受体拮抗剂，指能与受体结合，并能阻止激动剂产生效应的一类配体物质。拮抗剂对相应受体有亲和性，但没有效能，从而抑制了激动剂对受体的作用。拮抗剂可以结合受体的活性位点，也可以结合别构位点，甚至单独结合通常没有生物调节作用的位点来达到效果。拮抗剂和受体结合性质不同，所以结合时间有长有短，结合的可逆性也有不同。拮抗剂分为竞争性拮抗剂和非竞争性拮抗剂等类型。大部分药物拮抗剂都与内源性配体或底物竞争受体结合位点来达到效果。受体是可被配体结合而激活的大型蛋白质分子。受体可以结合在细胞膜上，也可存在于细胞内部，比如在细胞核或线粒体中。受体在活性位点与配体以非共价键结合，一个受体上可以有多个结合不同配体的位点。配体和受体在活性位点或别构位点结合后，都可以调节受体的活性。拮抗剂可以通过结合活性位点、别构位点，或者单独结合通常不参与生物调节的位点来产生效果。血清中的易嗜性抗体(HA)已被证实导致免疫检验的假阳性或是假阴性干扰，在免疫检测结合物中加入阻断剂能够消除HA的干扰。但是，在进行抗体检测中，由于标本中HA的来源是未知的，不能够准确的针对HA的结合位点进行操作，目前尚未有一个完全消除HA干扰的阻断剂。

现有专利CN201811323185.4异嗜性抗体阻断剂HBR-6及其制备方法，包括其可变区的氨基酸序列和核苷酸序列，其中，重链的3个互补决定区CDR序列分别为，CDR1：Phe-Thr-Ala-Asp-Thr-Ser-Ser，CDR2：Glu-Asp-Asp-Pro，CDR3：Val-Leu-Asp-Ser-Asp-Gly-Ser-Tyr；轻链的3个互补决定区CDR序列分别为，CDR1：Asn-Ile-Pro-Lys-Leu-Leu-Ile-Tyr，CDR2：Ile-Val-Met-Thr，CDR3：Gln-Gly-Glu-Asp-Ile-Ala-Thr-Tyr-Arg，制备的异嗜性抗体阻断剂亲和性不好，抗干扰能力不强，不适用于大规模工业化生产。

现有专利CN201811323396.8异嗜性抗体阻断剂HBT-1及其制备方法，包括其可变区的氨基酸序列和核苷酸序列，其中，重链的3个互补决定区CDR序列分别为，CDR1：Val-Gln-Ser-Ser-Ile-Thr，CDR2：Gln-Asp-Asp-Tyr-Ala-Tyr-Thr-Leu-Tyr，CDR3：Val-Tyr-Lys-Leu；轻链的3个互补决定区CDR序列分别为，CDR1：Gly-Asp-Val-Leu-Ser-Lys-Ser-Cys，CDR2：Lys-Asp-Arg-Phe，CDR3：His-Ile-Ile-Ser-Thr-Ser。制备的抗体亲和性不佳，且工艺复杂，工艺参数难以精准控制。

综上所述，现有技术存在的问题是：现有的HA阻断剂亲和性不高，无法实现完全消除HA干扰，会对免疫检测结果产生影响；HA阻断剂的制备工艺复杂，难以推广使用。

解决上述技术问题的难度：目前市场上已经有商品化的HA阻断剂如：IIR、NS-ABT、Heteroblock、MAB33及polyMAB33，其亲和性较差，与HA结合实现减少干扰的效果并不显著，导致错误结果出现；另外，现有的HA阻断剂的制备方法复杂，不适合规模化生产，难以推广使用。