[发明专利]用于检测血流感染病原菌的核酸试剂、试剂盒及系统和方法

说明书

本公开涉及一种用于检测血流感染病原菌的核酸试剂，其特征在于，所述核酸试剂包括分别独立存放或互相任意混合存放的磁珠、SEQ ID NO.1‑6所示的捕获探针、SEQ ID NO.8‑13所示的检测引物和SEQ ID NO.16‑18所示的检测探针，其中，所述磁珠修饰有亲和素，所述捕获探针修饰有生物素，所述亲和素与所述生物素能够特异性结合。本公开的核酸试剂对血流感染病原菌的特异性强、灵敏度高，能够实现血流感染病原菌的快速检测。

技术领域

本公开涉及生物技术领域，具体地，涉及一种用于检测血流感染病原菌的核酸试剂、试剂盒及系统。

背景技术

血流感染(Bloodstream infection，BSI)是指病原微生物与毒素侵入血液循环系统而引发的严重全身性感染，引发血流感染的病原微生物主要包括细菌、真菌及病毒等。近年来，BSI在全球范围内的发病率及病死率逐年上升，且BSI进展速度快，已成为一种常见的医院感染性疾病。在引发血流感染的病原菌中，革兰阴性菌占主要地位，其中，鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii，Ab)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)和肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae，KP)是引发血流感染的主要病原菌。

目前，血培养是诊断BSI的“金标准”，但其检测周期较长，通常需要12-24h，甚至更长的时间，且灵敏度较差，文献报道目前国内的血培养阳性率仅为16.9％，若患者先前用过抗生素，阳性率会进一步降低，严重影响了患者的诊断及最佳治疗时机。另外，还有一些非培养的辅助诊断，如目前国内外研究较多的血液降钙素原(procalcitonin，PCT)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(neutrophli/lymphocyte ratio，NLR)、C反应蛋白(C-reactiveprotein，CRP)以及白细胞计数(white blood cell，WBC)等，均具有一定的应用价值，但结论存在差异，特异性较差。

此外，有文献报道应用PCR技术可以直接从血流感染的血液中检测病原菌DNA，但是，发生血流感染的血液含菌量极少，成人血液中含菌量＜1CFU/mL，儿童为3-5CFU/mL，因此，直接从血流感染的血液中检测病原菌有以下局限性：(1)病原菌或其核酸含量低，较难检出或检测不准确；(2)目前的核酸提取技术步骤较为繁杂，费时长，收率低，且无法完全去除血液中影响PCR的抑制因子；(3)存在大量的人类基因组背景，影响病原菌或其核酸的检出；(4)PCR过程中易被污染。

发明内容

本公开的目的是提供一种快速、准确、灵敏度高、特异性好的检测血流感染病原菌的核酸试剂、试剂盒及系统。

为了实现上述目的，本公开提供一种用于检测血流感染病原菌的核酸试剂，所述核酸试剂包括分别独立存放或互相任意混合存放的磁珠、SEQ ID NO.1-6所示的捕获探针、SEQ ID NO.8-13所示的检测引物和SEQ ID NO.16-18所示的检测探针，其中，所述磁珠修饰有亲和素，所述捕获探针修饰有生物素，所述亲和素与所述生物素能够特异性结合。

可选地，相对于50～100pmol的SEQ ID NO.1所示的捕获探针，分别由SEQ IDNO.2-6所示的捕获探针的含量各自独立地为50～100pmol，所述磁珠的含量为0.2～0.8mg；

相对于0.4～1.0μmol的SEQ ID NO.8所示的检测引物，分别由SEQ ID NO.9-13所示的检测引物的含量各自独立地为0.4～1.0μmol，分别由SEQ ID NO.16-18所示的检测探针的含量各自独立地为0.1～0.4μmol。

可选地，所述核酸试剂还包括阳性内质控；

所述阳性内质控包括SEQ ID NO.7所示的捕获探针、SEQ ID NO.14-15所示的检测引物和SEQ ID NO.19所示的检测探针。