[发明专利]基于碱性磷酸酶触发的荧光和比色双读数传感器检测有机磷农药的分析方法

说明书

本发明公开基于碱性磷酸酶触发的荧光和比色双读数传感器检测有机磷农药的分析方法。所述分析方法包括以下步骤：将有机磷农药与碱性磷酸酶混合反应得到混合溶液，然后在混合溶液中加入L‑抗坏血酸2‑磷酸倍半镁盐水合物溶液、邻苯二胺溶液和Tris‑HCl缓冲溶液进行反应，记录溶液荧光光谱，通过荧光强度得出有机磷农药的浓度。本发明不需要借助昂贵精密仪器检测，没有严格复杂的实验操作过程，简化了检测方法，极大地降低了有机磷农药检测成本，本发明具有运行成本低、检测快速简便、选择性好等优点。

技术领域

本发明涉及分析检测领域，具体涉及基于碱性磷酸酶触发的荧光和比色双读数传感器检测有机磷农药的分析方法。

背景技术

药残留一直是当代农业生产和食品安全中最热门的问题之一。作为农药的一类，有机磷农药(OPPs)由于易于制备，成本低和杀虫效率高而在世界范围内广泛应用。然而，一些不合理使用会导致环境中水、土壤和大气的严重污染，引发一系列不可控制的食品安全和人类健康问题。农药的高毒性在于其可以抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)、碱性磷酸酶(ALP)的活性。

传统检测有机磷农药的方法主要有液相色谱(LC)，气相色谱(GC)，气相色谱与质谱相结合测定法(GC/MS)，酶联免疫吸附测定(ELISA)测试等。这些方法中的大多数具有耗时且操作复杂的缺点。基于酶抑制型的生物传感用于对OPPs检测，具有灵敏度高、分析速度快、成本低等优点。因此，开发一些易于操作、价格低廉的新型酶生物传感技术，用于实现对OPPs的高灵敏检测对环境保护、食品安全及人类健康都具有着重要而深远的意义。由于OPPs可以更快速和简单地检测，其已被广泛用于荧光中，比色，电化学，表面增强拉曼等。在这些方法中，荧光方法更灵敏和方便。然而，大多数荧光测定基于纳米材料或荧光分子之间的荧光共振能量转移效应(FRET),材料制备复杂耗时且表征繁琐，因此需要构建一种成本低、操作简单、无标记、无繁琐修饰过程的检测方法。

发明内容

本发明是针对上次存在的技术问题提供了一种基于碱性磷酸酶触发的荧光和比色双读数传感器检测有机磷农药的分析方法。

一种基于碱性磷酸酶触发的荧光和比色双读数传感器检测有机磷农药的分析方法，所述分析方法包括以下步骤：

第一步：将不同浓度的有机磷农药分别与碱性磷酸酶进行混合反应，得到对应的混合溶液；在所述混合溶液中加入L-抗坏血酸2-磷酸倍半镁盐水合物溶液，苯二胺溶液和Tris-HCl缓冲溶液，30～40℃下反应得到对应的混合物溶液，记录各混合物溶液的荧光光谱强度，建立荧光光谱强度与有机磷农药浓度的线性回归方程；

第二步，将待测样品经预处理后得到溶液，将该溶液与碱性磷酸酶进行混合反应，得到混合溶液；在所述混合溶液中加入L-抗坏血酸2-磷酸倍半镁盐水合物溶液，邻苯二胺溶液和Tris-HCl缓冲溶液，30～40℃下反应得到对应的混合物溶液，记录混合物溶液的荧光光谱强度，将荧光强度代入线性回归方程，即可得到待测样品中有机磷农药的浓度。

本发明技术方案中：第一步中不同浓度的有机磷农药分别为20pg/mL、50pg/mL、500pg/mL、5ng/mL、50ng/mL、500ng/mL和1000ng/mL。

本发明技术方案中：碱性磷酸酶的浓度为1.8mU/mL～20mU/mL。

本发明技术方案中：所述磷农药与碱性磷酸酶的体积比0.45～1.5：1。

本发明技术方案中：所述机L-抗坏血酸2-磷酸倍半镁盐水合物溶液的浓度为0.5mM～6.25mM，邻苯二胺溶液的浓度为2.5-15mM。

本发明技术方案中：所述Tris-HCl缓冲溶液组成为：15～25mM Tris和15～25mMMgCl₂，且该缓缓液的pH值为7.0～9.5。

本发明技术方案中：所述的有机磷农药为毒死蜱、硫磷或甲基对硫磷。