[发明专利]基于碱性磷酸酶触发的荧光和比色双读数传感器检测有机磷农药的分析方法

权利要求书

1.基于碱性磷酸酶触发的荧光和比色双读数传感器检测有机磷农药的分析方法，其特征在于：所述分析方法包括以下步骤：

第一步：将不同浓度的有机磷农药分别与碱性磷酸酶进行混合反应，得到对应的混合溶液；在所述混合溶液中加入L-抗坏血酸2-磷酸倍半镁盐水合物溶液，苯二胺溶液和Tris-HCl缓冲溶液，30～40℃下反应得到对应的混合物溶液，记录各混合物溶液的荧光光谱强度，建立荧光光谱强度与有机磷农药浓度的线性回归方程；

第二步，将待测样品经预处理后得到溶液，将该溶液与碱性磷酸酶进行混合反应，得到混合溶液；在所述混合溶液中加入L-抗坏血酸2-磷酸倍半镁盐水合物溶液，邻苯二胺溶液和Tris-HCl缓冲溶液，30～40℃下反应得到对应的混合物溶液，记录混合物溶液的荧光光谱强度，将荧光强度代入线性回归方程，即可得到待测样品中有机磷农药的浓度。

2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于：第一步中不同浓度的有机磷农药分别为20pg/mL、50pg/mL、500pg/mL、5ng/mL、50ng/mL、500ng/mL和1000ng/mL。

3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于：碱性磷酸酶的浓度为1.8mU/mL～20mU/mL。

4.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述磷农药与碱性磷酸酶的体积比0.45～1.5：1。

5.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述机L-抗坏血酸2-磷酸倍半镁盐水合物溶液的浓度为0.5mM～6.25mM，邻苯二胺溶液的浓度为2.5-15mM。

6.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述Tris-HCl缓冲溶液组成为：15～25mM Tris和15～25mM MgCl₂，且该缓冲液的pH 7.0～9.5。

7.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述的有机磷农药为毒死蜱、硫磷或甲基对硫磷。

8.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于：碱性磷酸酶：L-抗坏血酸2-磷酸倍半镁盐水合物溶液：邻苯二胺溶液：Tris-HCl缓冲溶液的体积比为1：0.5～3：0.5～3：5～8。

9.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于：碱性磷酸酶在碱性条件下催化底物L-抗坏血酸2-磷酸倍半镁盐水合物，产生L-抗坏血酸，L-抗坏血酸与邻苯二胺发生反应，生成具有喹喔啉结构的荧光物质，在425nm处出现强的荧光发射峰；当有机磷农药存在时，有机磷农药会抑制碱性磷酸酶的活性，导致L-抗坏血酸产量降低，生成的荧光产物浓度降低，荧光强度急剧下降，因而是否存在有机磷农药以及含有不同浓度的有机磷农药会导致反应溶液有不同的颜色变化，当含有有机磷农药时，随着有机磷农药浓度的上升，在紫外灯照射下，反应溶液颜色由亮蓝色渐变为浅蓝色，即可达到可视化检测。