[发明专利]一种红麻HcCLA1基因VIGS沉默体系

权利要求书

1.一种红麻1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因HcCLA1，其特征在于：所述1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因HcCLA1的全长基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种用于沉默如权利要求1所述红麻1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因HcCLA1的HcCLA1基因特异性片段，其特征在于：所述HcCLA1基因特异性片段的核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示。

3.一种如权利要求1所述红麻1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因HcCLA1的VIGS病毒载体，其特征在于：利用gateway重组克隆技术将HcCLA1基因特异性片段连接至VIGS病毒骨架载体pTRV2中，构建获得重组病毒载体pTRV2--HcCLA1；所述HcCLA1基因特异性片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

4.一种如权利要求1所述红麻1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因HcCLA1的VIGS沉默体系的构建方法，包括以下步骤：

（1）利用冻融法将重组病毒载体pTRV2-HcCLA1转化至农杆菌GV3101；

所述重组病毒载体pTRV2-HcCLA1是利用gateway重组克隆技术将HcCLA1基因特异性片段连接至VIGS病毒骨架载体pTRV2中，构建获得重组病毒载体pTRV2--HcCLA1；所述HcCLA1基因特异性片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

（2）将转化后的阳性农杆菌菌液与pTRV1菌液按菌液体积比1:1混合制成混合菌液；

（3）将种子浸泡于步骤（2）的混合菌液中，24℃浸种24 h；

（4）将浸泡后的种子点在清水浇透的土壤中，于24℃/20 ℃，14 h/10 h，光/暗周期生长，观察红麻真叶的表型，并检测叶片中HcCLA1的表达情况，即构建得到红麻1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因HcCLA1的沉默体系。

5.如权利要求2所述的HcCLA1基因特异性片段在沉默红麻1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因HcCLA1中的应用；所述红麻1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因HcCLA1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

6.如权利要求3所述的一种红麻1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因HcCLA1的VIGS病毒载体在沉默红麻1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因HcCLA1中的应用；所述红麻1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因HcCLA1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

7.如权利要求4所述的方法在沉默红麻1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因HcCLA1中的应用；所述红麻1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因HcCLA1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。