[发明专利]一种高稳定性酰化黑米花色苷的制备方法

权利要求书

1.一种高稳定性酰化黑米花色苷的制备方法，其特征在于：包括下列步骤：

步骤1：将黑米与纯化水按质量体积比1 kg:10～20L混合，得到浆料，然后将所述浆料研磨至细度为5-25µm，得到细化黑米浆；

步骤2：向黑米浆中添加浓度2-3.5%的柠檬酸溶液，调节黑米浆的pH为2.5-4.0；然后添加α-淀粉酶，使溶液α-淀粉酶浓度为80-120U/ml；控制黑米浆的温度为40-50℃，保温2-3h，同时，每间隔10-15min，对黑米浆进行超声波处理1.5-3.0min，超声波频率25-35 KHz、功率密度0.4-0.5 W/cm²，处理完成后，得到黑米花色苷浸提液；

步骤3：对黑米花色苷浸提液进行离心，取上清液，得到黑米花色苷水提液；

步骤4：将黑米花色苷水提液放入截留分子量为3000 Da的超滤膜设备的料液桶中，控制操作压力为0.3 Mpa，过程中添加去离子水至流出液没有花色苷流出为止；通过超滤操作，除去蛋白质、淀粉和多糖等大分子物质，收集超滤流出液，备用；

步骤5：将超滤流出液通过截留分子量为200-400Da的纳滤膜进行浓缩，控制操作压力为0.2Mpa；当超滤流出液的体积减少至原来体积的18-22%时，停止纳滤，收集截留液，得到黑米花色苷截留液；

步骤6：将黑米花色苷截留液上AB-8大孔树脂柱，上样液量为1倍树脂柱体积，上样流速为1倍柱体积/小时，然后用去离子水冲柱，当流出液澄清后，以体积分数为80%的乙醇为洗脱剂洗脱树脂柱，洗脱液为2.5倍树脂柱体积，流速为1倍柱体积/小时；将洗脱液减压浓缩除去乙醇，接着上30-60目的聚酰胺树脂柱，上样量为0.5倍树脂柱体积，上样流速为1倍柱体积/小时，然后用去离子水冲柱。

2.再用以体积分数为30%的乙醇为洗脱剂洗脱树脂柱，洗脱液为2～2.5倍树脂柱体积，流速为1倍柱体积/小时，收集洗脱液，减压浓缩除去乙醇，得到树脂纯化后的黑米花色苷浓缩液；

步骤7：对树脂纯化后的黑米花色苷浓缩液进行冷冻干燥，在真空表压-0.09～-0.10MPa、温度-20～-60℃条件下，真空冷冻干燥至水分含量小于5%，得到粉末状的黑米花色苷；

步骤8：利用4A分子筛对叔戊醇进行干燥，对黑米花色苷和Novozym 435脂肪酶进行真空干燥；将干燥后的黑米花色苷和月桂酸按照1:40～1:50的摩尔比混合，然后加入叔戊醇，连续搅拌至完全溶解，接着加入Novozym 435脂肪酶，使酶在溶液中的浓度为10～20 g/L，最后加入4A分子筛吸收反应过程中产生的水；在50～55 ^oC下振荡反应24～48 h后，过滤分离Novozym 435脂肪酶及4A分子筛，滤液减压浓缩至干，然后通过滤液萃取、制备液相色谱法对酰化产物进行分离、纯化；对分离液 真空冷冻干燥至水分含量小于或等于5%，得到紫黑色粉末状的矢车菊素-3-葡萄糖苷—月桂酸酰化产物。