[发明专利]松解保护剂及其制备高存活率单细胞悬液的方法及其应用

权利要求书

1.松解保护剂，其特征在于，由以下组分混合而成：

浓度均为14～58g/L的分散酶II和卡那霉素，

含量为0.8x10⁶～1.25x10⁶U/L的胶原酶，

以及0.7g～2.2g/L的葡萄糖。

2.根据权利要求1所述的松解保护剂，其特征在于，还包括0.065～0.174g/L的胰肽酶。

3.根据权利要求1或2所述的松解保护剂，其特征在于，还包括浓度为0.05～0.08g/L的一水合磷酸氢二钠、浓度为0.45x10^-3～0.6x10^-3mol/L的磷酸二氢钾和0.1～0.22mol/L的氯化钠。

4.根据权利要求1或3所述的松解保护剂，其特征在于，还包括浓度为2.5x10^-3～3.2x10^-3mol/L的氯化钙和等浓度的氯化镁，以及浓度为5x10^-3～6.5x10^-3mol/L的氯化钾。

5.根据权利要求4所述的松解保护剂，其特征在于，还包括浓度为3.8x10^-3～5.0x10^-3mol/L的碳酸氢钠。

6.根据权利要求5所述的松解保护剂，其特征在于，还包括100U/L～120U/L的青霉素,98～110mg/L的四环素,16～25mg/L的庆大霉素。

7.根据权利要求6所述的松解保护剂，其特征在于，所述分散酶II的浓度分别为19-22g/L，所述卡那霉素的浓度分别为20-21g/L，胶原酶的含量为0.96x10⁶～1.03x10⁶U/L，葡萄糖浓度为0.98～1.03g/L，碳酸氢钠的浓度为4.0x10^-3mol/L。

8.根据权利要求7所述的松解保护剂，其特征在于，所述一水合磷酸氢二钠的浓度为0.06g/L、磷酸二氢钾的浓度为0.45x10^-3mol/L和氯化钠的浓度为0.14～0.16mol/L；氯化镁和氯化钙的浓度均为3.0x10^-3～3.1x10^-3mol/L，氯化钾的浓度为5.4x10^-3～5.6x10^-3mol/L。

9.根据权利要求4-8任一项所述的松解保护剂在获取高存活率单细胞悬液中的应用。

10.高存活率单细胞悬液的制备方法，其特征在于：采用权利要求8中的松解保护剂对目标组织块进行浸泡，再采用超声消融仪对组织块进行消融，具体包括以下步骤：

步骤S100，在无菌环境下取目标组织块,并用剪刀将组织块剪碎至不大于2mm³的小块；

步骤S200，将目标组织块置于容器中用PBS缓冲液清洗，直到PBS缓冲液目测澄清为止，其中组织块的最大外部尺寸不超过2毫米；

步骤S300，将目标组织块置于1.5毫升的EP管中，同时，在EP管中加入权利要求8中所述松解保护剂，静置5-15分钟；

步骤S400，将超声消融仪的频率调整到15-60kHz，功率调整到1-10w，将超声消融仪的振子置于EP管中，振子距离EP管底部距离保持1-2毫米，消融时间设定不超过9秒；

步骤S500，取出振子，采用300目尼龙网过滤，1000-1500r/min离心，去除上清液，取10ul单细胞沉淀置于1ml生理盐水中获得单细胞悬液。