[发明专利]一种抗狂犬病病毒单克隆抗体、制备方法及用途

说明书

本发明涉及医学生物抗体技术领域，提供了一种抗狂犬病病毒单克隆抗体、制备方法及用途。该单克隆抗体的轻链可变结构域包含高变区CDR1、CDR2、CDR3，氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1～3所示；重链可变结构域包含高变区CDR1＇、CDR2＇、CDR3＇，氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4～6所示。经检测，该单克隆抗体具有高体外中和活性、高中和指数，抗原表位靠近狂犬病病毒糖蛋白中和II表位或与位于中和II表位内，其针对的关键氨基酸位点一个为aa205，另一个由37、194和204位氨基酸共同构成，对街毒株有很好的中和能力；此外，其Tm值为70.58℃，具有较好的热稳定性，提示有可能作为抗狂犬病病毒被动免疫制剂产品或开发体外诊断试剂盒。

技术领域

本发明涉及医学生物抗体技术领域，涉及一株具有较高体外抗狂犬病病毒活性的抗狂犬病病毒单克隆抗体，其制备方法及其在检测和中和狂犬病病毒方面的用途。

背景技术

狂犬病毒(Rabies virus,RV)属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)、狂犬病毒属(Lyssavirus)。外形呈弹状，核衣壳呈螺旋对称，表面具有包膜，内含有单链RNA，为RNA病毒，是引起狂犬病的病原体。狂犬病毒主要分为7个基因型，编码5种结构蛋白，其中糖蛋白(Glycoprotein，G)为跨膜蛋白，构成病毒表面的突起，是主要保护性抗原，可以诱导保护性抗体产生。

狂犬病病毒疫苗是预防狂犬病最有效的手段，但对于III级以上暴露，单独使用狂犬病病毒疫苗可能导致免疫失败，需要与被动免疫制剂一同使用。抗狂犬病病毒被动免疫制剂包括抗狂犬病人免疫球蛋白和马抗狂犬病病毒血清，二者均能产生有效的保护。但抗狂犬病人免疫球蛋白价格昂贵且存在伦理问题，马抗狂犬病病毒血清则存在血清病的风险，在一定程度上限制了上述产品的使用。因此需要研发新一代的抗狂犬病病毒被动免疫制剂，而抗狂犬病病毒单克隆抗体被认为是上述产品最有可能的替代品。

发明内容

本发明是为解决上述技术问题而进行的，其目的在于提供一种新型的抗狂犬病病毒单克隆抗体，其关键氨基酸位点在街毒株中突变率较低，具有较高的体外抗狂犬病病毒活性，对狂犬病病毒CVS-11和CTN株中和指数较高。本发明的另一目的在于提供该单克隆抗体在狂犬病重组被动免疫制剂产品或诊断试剂开发中的用途。本发明的第三目的在于提供该单克隆抗体的制备方法。

本发明的第一方面在于，提供了一种抗狂犬病病毒单克隆抗体(编号为R42抗体)，具有：轻链可变结构域，包含高变区CDR1、CDR2、CDR3；重链可变结构域，包含高变区CDR1＇、CDR 2＇、CDR 3＇，

其中，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：Ala-Ser-Asn-Ile-Arg-Ser-Ser-Thr；

CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示：Gly-Asp-His；

CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示：Ala-Val-Trp-Asp-Asp-His-Leu-Asn-Ile-Val-Leu；

CDR 1＇的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示：Gly-Ala-Ser-Thr-Asn-Ser-Tyr-Tyr；

CDR 2＇的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示：Met-Asn-Tyr-Arg-Gly-Thr-Pro；

CDR 3＇的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示：Ala-Arg-Val-Asp-Asn-Trp-Asn-Phe-Asp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile。

在具体形式上，该单克隆抗体选自包含有轻链可变结构域高变区和重链可变结构域高变区的片段、包含有轻链可变结构域和重链可变结构域的片段、或具有全长重链和轻链的完整抗体分子。