[发明专利]一种抗狂犬病病毒单克隆抗体、制备方法及用途

权利要求书

1.一种抗狂犬病病毒单克隆抗体，其特征在于，具有：

轻链可变结构域，包含高变区CDR1、CDR2、CDR3；以及

重链可变结构域，包含高变区CDR1＇、CDR 2＇、CDR 3＇，

其中，所述CDR1的氨基酸序列为：Ala-Ser-Asn-Ile-Arg-Ser-Ser-Thr；

所述CDR2的氨基酸序列为：Gly-Asp-His；

所述CDR3的氨基酸序列为：Ala-Val-Trp-Asp-Asp-His-Leu-Asn-Ile-Val-Leu；

所述CDR 1＇的氨基酸序列为：Gly-Ala-Ser-Thr-Asn-Ser-Tyr-Tyr；

所述CDR 2＇的氨基酸序列为：Met-Asn-Tyr-Arg-Gly-Thr-Pro；

所述CDR 3＇的氨基酸序列为：Ala-Arg-Val-Asp-Asn-Trp-Asn-Phe-Asp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile 。

2.根据权利要求1所述的抗狂犬病病毒单克隆抗体，其特征在于：

其中，该单克隆抗体选自包含有轻链可变结构域高变区和重链可变结构域高变区的片段、包含有轻链可变结构域和重链可变结构域的片段、或具有全长重链和轻链的完整抗体分子。

3.根据权利要求1所述的抗狂犬病病毒单克隆抗体，其特征在于：

编码该单克隆抗体轻链可变结构域的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，编码重链可变结构域的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

4.一种表达载体，其特征在于，该表达载体承载有编码权利要求1~3任一项所述的抗狂犬病病毒单克隆抗体的核苷酸序列。

5.权利要求1所述的抗狂犬病病毒单克隆抗体在制备预防或治疗狂犬病药物中的用途。

6.权利要求1所述的抗狂犬病病毒单克隆抗体在制备狂犬病毒检测试剂或检测试剂盒中的用途。

7.根据权利要求6所述的抗狂犬病病毒单克隆抗体在制备狂犬病毒检测试剂或检测试剂盒中的用途，其特征在于：

其中，所述检测试剂中包括经生物标记或化学标记的抗狂犬病病毒单克隆抗体；

所述检测试剂盒中包括抗狂犬病病毒单克隆抗体经生物标记或化学标记得到的标记复合物。

8.一种抗狂犬病病毒被动免疫制剂，其特征在于，包括活性成分以及药学上可接受的药物载体，所述活性成分包括权利要求1或2所述的抗狂犬病病毒单克隆抗体、编码权利要求1或2所述的抗狂犬病病毒单克隆抗体的核苷酸、或权利要求4所述的表达载体。

9.权利要求1所述的抗狂犬病病毒单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

A、获得抗狂犬病病毒scFv序列

从抗狂犬病病毒噬菌体库中选择效价10IU的几十份狂犬疫苗免疫血样建库，抗体可变区基因整合在噬粒上；而后将酶切后的抗体可变区克隆至PET-26b载体上，并转化大肠杆菌BL21，涂布于含卡那霉素的LB琼脂糖平皿，挑选克隆，使用T7启动子通用引物测序，获得scFv序列，

B、真核瞬时表达及抗体亲和纯化

扩增轻链可变结构域和重链可变结构域，并将其分别连接至PGP5con轻链载体以及PGP5con重链载体，而后将两种连接产物分别转化大肠杆菌Top10，涂布含卡那霉素的LB琼脂平板，37℃过夜培养后挑选克隆测序，抽提获得抗体瞬时表达用轻、重链质粒；转染HEK293 EBNA1细胞后，使用Mabselect SuRe介质纯化表达的抗体，PBS溶液洗杂后，pH 3.5的乙酸钠溶液洗脱，获得纯化的抗狂犬病病毒单克隆抗体，并进行性质分析。